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乙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)試劑

技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）基因分型檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)乙型肝炎病毒基因分型定性檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

我國(guó)2006年乙型肝炎流行病學(xué)調(diào)查表明，我國(guó)1—59歲一般人群乙型肝炎表面抗原（Hepatitis B surface antigen，HBsAg）攜帶率為7.18%，5歲以下兒童的HBsAg僅為0.96%。據(jù)此推算，我國(guó)現(xiàn)有的慢性HBV感染者約9300萬人，其中慢性乙型肝炎患者約2000萬例；由于不同的乙型肝炎病毒基因型對(duì)現(xiàn)有藥物治療可能存在不同的治療響應(yīng)，乙型肝炎病毒分型基因檢測(cè)在慢性乙型肝炎患者治療中的作用正被越來越多人所關(guān)注。

根據(jù)HBV全基因序列異質(zhì)性≥8％的界線，可將其分為不同的基因型。目前，已鑒定的HBV基因型有A—I九種，基因型與血清亞型之間的關(guān)系已被清晰論證?；蛐蛄械膯蝹€(gè)核酸的變化即可能改變血清亞型，但血清亞型不能反映基因的差異。通過對(duì)HBV全序列分析發(fā)現(xiàn)，在不同基因型之間S區(qū)段異質(zhì)性最大，而型內(nèi)S區(qū)段的異質(zhì)性最小，從而也可以根據(jù)S區(qū)基因序列異質(zhì)性≥4％的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)分不同的基因型。在此基礎(chǔ)上，發(fā)展了一系列簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確的分型方法，推動(dòng)了HBV基因型的流行病學(xué)及臨床相關(guān)研究。

基于現(xiàn)階段研究，在我國(guó)HBV以C型和B型為主。HBV基因型與疾病進(jìn)展和干擾素α治療效果有關(guān)。與C基因型感染者相比，B基因型感染者較早出現(xiàn)乙型肝炎e抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）血清學(xué)轉(zhuǎn)換，較少進(jìn)展為慢性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌；并且HBeAg陽性患者對(duì)干擾素α治療的應(yīng)答率高于C基因型；A基因型患者應(yīng)答率高于D基因型。其他基因型與疾病譜的關(guān)系還未有特殊發(fā)現(xiàn)。但是，由于基因型分布不均衡和樣本大小的影響，還需要作多中心大樣本的研究方能進(jìn)一步了解基因型與疾病譜之間的關(guān)系。 
    HBV基因型的分布具有明顯的地理學(xué)特點(diǎn)，大體上如下：

A基因型主要流行于美國(guó)及北歐國(guó)家；B和C基因型主要分布在亞洲及遠(yuǎn)東地區(qū)；D基因型在世界各地均有發(fā)現(xiàn),但主要分布于地中海地區(qū)；E基因型僅限于非洲；F基因型則分布在中美洲；G、H、I及J型基因型的地理分布尚不清楚。隨著時(shí)間的推移，新的基因型可能會(huì)被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)。

HBV基因分型檢測(cè)試劑是指利用包括分子生物學(xué)相關(guān)方法在內(nèi)的核酸檢測(cè)技術(shù)，以HBV基因序列為檢測(cè)靶標(biāo)，對(duì)人血清、血漿等樣本中的HBV不同基因型進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑。結(jié)合臨床表現(xiàn)和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，可作為乙型肝炎感染者臨床診療的輔助指標(biāo)之一。

本指導(dǎo)原則適用于基于實(shí)時(shí)熒光（polymerase chain reaction，PCR）方法的HBV基因分型檢測(cè)試劑，其他方法學(xué)的定性檢測(cè)方法可參照本指導(dǎo)原則，但應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性確定其中具體內(nèi)容是否適用，如不適用，應(yīng)另行選擇符合自身方法學(xué)特性的技術(shù)要求或評(píng)價(jià)方法。本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊(cè)和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜（包括產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料等），應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）（以下簡(jiǎn)稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)及不同基因型檢出能力等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。若尚無同類產(chǎn)品批準(zhǔn)上市，則應(yīng)詳細(xì)對(duì)該產(chǎn)品的有效性及安全性進(jìn)行論述，說明理論依據(jù)。

提交的資料應(yīng)符合《辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)

申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料

應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品的選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對(duì)穩(wěn)定，并提交工藝驗(yàn)證報(bào)告；如主要原材料購(gòu)自其他供貨商，應(yīng)提供的資料包括：供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。主要包括以下內(nèi)容：

1.核酸分離/純化組分（如有）的主要組成、原理介紹及相關(guān)的驗(yàn)證資料。

2.PCR和組分的主要原料（包括引物、探針、各種酶及其他主要原料）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)研究資料，主要包括以下內(nèi)容：

2.1脫氧三磷酸核苷（dNTP）

核苷酸的組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP，對(duì)純度、濃度、保存穩(wěn)定性等的驗(yàn)證資料。

2.2引物

由一定數(shù)量的堿基構(gòu)成的特定序列，通常采用（Deoxyribonucleic acid，DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）或其他適宜方法純化。需提供對(duì)分子量、純度、穩(wěn)定性、功能性實(shí)驗(yàn)等的驗(yàn)證資料。如為外購(gòu)，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如PAGE電泳結(jié)果或高效液相色譜法（HPLC）分析圖譜。

2.3探針

特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補(bǔ)核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測(cè)。合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）或其他適宜方法純化，在5’-端(和/或3’-端)進(jìn)行標(biāo)記，并經(jīng)HPLC或其他適宜方法純化，純度應(yīng)達(dá)到HPLC純。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如HPLC分析圖譜，應(yīng)對(duì)探針的分子量及標(biāo)記的熒光素進(jìn)行核實(shí)，并進(jìn)行功能性試驗(yàn)驗(yàn)證。

2.4酶

DNA聚合酶，應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，如：94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性；尿嘧啶糖基化酶（UNG），具有尿嘧啶糖基化活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性，應(yīng)對(duì)酶活性有合理驗(yàn)證。如使用其他工具酶，應(yīng)提供其詳細(xì)的研究資料。

2.5核酸類檢測(cè)試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無DNase和RNase污染。

2.6企業(yè)內(nèi)部參考品及試劑內(nèi)對(duì)照（質(zhì)控品）：

由于乙型肝炎病毒不易培養(yǎng)，制備相應(yīng)的參考品及質(zhì)控品時(shí)，參考品設(shè)置建議采用滅活病毒的血清/血漿。并且參考品及質(zhì)控品與被測(cè)臨床樣本在整個(gè)試驗(yàn)過程中應(yīng)保持相同的檢測(cè)方式。

企業(yè)內(nèi)部參考品以及質(zhì)控品設(shè)置必須客觀合理，能夠充分評(píng)價(jià)產(chǎn)品的質(zhì)量。應(yīng)采用金標(biāo)準(zhǔn)或其他方法對(duì)企業(yè)內(nèi)部參考品以及質(zhì)控品中物質(zhì)成分進(jìn)行確認(rèn)。

2.6.1陽性參考品及陽性質(zhì)控品

 陽性參考品應(yīng)包含試劑盒所能檢測(cè)的所有基因型（所有的單基因型以及所有的重組基因型），每個(gè)基因型應(yīng)設(shè)置不同濃度水平，應(yīng)能滿足驗(yàn)證產(chǎn)品性能的需要，至少設(shè)置兩個(gè)濃度水平（弱陽性、中或強(qiáng)陽性）；常見基因型（如B型、C型）陽性參考品設(shè)置建議采用滅活病毒的血清/血漿。其他基因型陽性參考品設(shè)置可采用模擬臨床樣本。對(duì)于陽性參考品的獲取方式建議使用金標(biāo)準(zhǔn)的方法或同類方法或者其他能證明問題的方法進(jìn)行確認(rèn)。

陽性質(zhì)控品應(yīng)包含目標(biāo)靶基因，用于監(jiān)控整個(gè)檢測(cè)過程，包括：核糖核酸提取，基因擴(kuò)增和檢測(cè)。陽性質(zhì)控品作為單獨(dú)檢測(cè)過程，用于模擬患者樣本，用于與患者樣本進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。

2.6.2陰性參考品及陰性質(zhì)控品

可采用經(jīng)確認(rèn)無目標(biāo)靶基因的序列的樣本。陰性參考品及陰性質(zhì)控品對(duì)照物可反映非特異擴(kuò)增或檢測(cè)過程，當(dāng)不存在目標(biāo)序列時(shí)不會(huì)得到相關(guān)信號(hào)。陰性參考品設(shè)置建議采用滅活的血清/血漿。陰性質(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取，對(duì)假陽性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

2.6.3靈敏度參考品（檢測(cè)限參考品）

靈敏度參考品是評(píng)價(jià)產(chǎn)品檢測(cè)能力的重要工具，對(duì)于定性產(chǎn)品來說，其設(shè)計(jì)的合理性顯得非常重要。在基因型設(shè)置方面，應(yīng)包括試劑盒所包含的所有基因型。在濃度設(shè)置方面，應(yīng)采用核酸定量的方法對(duì)該參考品進(jìn)行定量檢測(cè)，明確被測(cè)物的具體量值，設(shè)置濃度應(yīng)接近產(chǎn)品最低檢出限。

2.6.4精密度參考品

精密度參考品應(yīng)反映產(chǎn)品檢測(cè)的重復(fù)性以及重復(fù)檢測(cè)的穩(wěn)

定性，該部分參考品應(yīng)采用臨床樣本作為精密度參考品，需包括陰性、弱陽性、中或強(qiáng)陽性三個(gè)濃度水平的精密度驗(yàn)證。

2.6.5內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）

與目標(biāo)靶基因平行提取，擴(kuò)增；用于對(duì)檢測(cè)管內(nèi)抑制物造成的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）可采用競(jìng)爭(zhēng)性或非競(jìng)爭(zhēng)性的引物設(shè)置。

2.6.6其他需要注意問題

如單個(gè)產(chǎn)品檢驗(yàn)原理為兩種方法學(xué)或多種方法學(xué)聯(lián)合檢測(cè)的方法，應(yīng)對(duì)產(chǎn)品中每種方法學(xué)均設(shè)置參考品及質(zhì)控品，用于對(duì)不同方法學(xué)的質(zhì)量監(jiān)控，例如：檢測(cè)原理為PCR-雜交方法聯(lián)用，在這種情況下，不僅需在PCR環(huán)節(jié)設(shè)置參考品及質(zhì)控品對(duì)擴(kuò)增過程進(jìn)行質(zhì)量控制；同時(shí)在基因探針雜交環(huán)節(jié)也必須設(shè)置質(zhì)控程序?qū)﹄s交過程進(jìn)行質(zhì)量控制。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

基本生產(chǎn)工藝主要包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對(duì)pH、電導(dǎo)率等關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制。

生產(chǎn)工藝研究的資料應(yīng)能對(duì)反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)，主要包括以下內(nèi)容：

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以圖表方式表示。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.基因位點(diǎn)選擇、PCR方法學(xué)特性介紹。

4.DNA提取純化方法優(yōu)化，建議包含純化步驟，內(nèi)標(biāo)、質(zhì)控品均應(yīng)全程參與提取純化，不建議采用煮沸法進(jìn)行DNA提取。

5.確定最佳PCR反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體積等。

6.確定PCR各階段溫度、時(shí)間及循環(huán)數(shù)的研究資料。

7.對(duì)于基線閾值（threshold）和閾值循環(huán)數(shù)（Ct）確定的研究資料。

8.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件的對(duì)比分析，如果有差異應(yīng)分別詳述。

如單個(gè)產(chǎn)品檢驗(yàn)原理為兩種方法學(xué)或多種方法學(xué)聯(lián)合檢測(cè)的方法，例如：檢測(cè)原理為PCR方法和基因探針雜交方法聯(lián)用。應(yīng)在上述1至8項(xiàng)基礎(chǔ)上完善以下工作：

1.主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)原理介紹。

2.雜交膜條的制備工藝。

3.確定最佳雜交反應(yīng)體系的研究資料，包括酶濃度、探針濃度、樣本量、加樣量及反應(yīng)體積等。

4.確定雜交各階段溫度、時(shí)間的研究資料。

5.交叉污染和攜帶污染研究。

該類產(chǎn)品適用于檢測(cè)乙型肝炎病毒感染人群，在臨床檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，部分臨床樣本會(huì)出現(xiàn)高濃度的乙型肝炎病毒載量。這部分臨床樣本在提取過程中增加了交叉污染及攜帶污染的可能性。在核酸提取過程中，從而導(dǎo)致假陽性的結(jié)果。

如產(chǎn)品配套采用自動(dòng)提取設(shè)備提取DNA，在攜帶污染試驗(yàn)中，建議將高濃度陽性（病毒濃度至少不低于10⁸IU/mL）樣本與陰性樣本在同一待提取反應(yīng)板中連續(xù)交替排列并應(yīng)進(jìn)行不少于5輪上述提取研究。建議試驗(yàn)使用的高陽性樣本水平應(yīng)接近該產(chǎn)品檢測(cè)能力的上限。以鄰近高陽性樣本的陰性樣本的陰性結(jié)果對(duì)比未鄰近高陽性樣本的陰性結(jié)果，評(píng)估攜帶和交叉污染的影響。

如產(chǎn)品檢測(cè)原理中涉及開管檢測(cè)過程，如自動(dòng)化膜條雜交儀，應(yīng)參照該項(xiàng)要求進(jìn)行驗(yàn)證。

（四）分析性能評(píng)估資料

企業(yè)應(yīng)提交在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。如有相應(yīng)的國(guó)家參考品，應(yīng)在分析性能評(píng)估階段采用國(guó)家參考品對(duì)產(chǎn)品性能進(jìn)行驗(yàn)證。建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：

1.陽性/陰性參考品符合率

所有基因型別的陽性參考品均應(yīng)按要求檢出陽性，考慮到濃度梯度的不同，應(yīng)對(duì)各水平陽性參考品設(shè)置相應(yīng)Ct值的限制；陰性參考品應(yīng)按要求檢出為陰性。

2.最低檢測(cè)限（分析靈敏度）

建議采用95%（n≥20）的陽性檢出率作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)明確各基因型的最低檢出限。申報(bào)試劑應(yīng)在最低檢出限或接近最低檢出限的病毒濃度對(duì)說明書描述的所有基因型進(jìn)行驗(yàn)證。

3.分析特異性

3.1交叉反應(yīng)

用于HBV DNA分型檢測(cè)試劑交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體種類主要考慮以下幾方面可能性：

3.1.1核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的臨床癥狀的其他病原體。

3.1.2申報(bào)產(chǎn)品中不同基因型以及乙型肝炎病毒其他基因型對(duì)被檢測(cè)基因型的影響。對(duì)于難以獲得的基因型, 可采用針對(duì)該基因型構(gòu)建的質(zhì)?；蚱渌蚬こ坍a(chǎn)品進(jìn)行交叉驗(yàn)證。

3.1.3建議用高濃度的病原體對(duì)乙型肝炎病毒核酸陰性樣本進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證。申請(qǐng)人應(yīng)提供所有用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病毒和細(xì)菌的來源、種屬/型別和濃度確認(rèn)等試驗(yàn)資料。

3.2干擾物質(zhì)

潛在的干擾物質(zhì)主要包括：內(nèi)源性干擾物質(zhì)和外源性干擾物質(zhì)。

3.2.1內(nèi)源性干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素等。

3.2.2外源性干擾物質(zhì)：常用抗凝劑，臨床常用抗病毒藥物如：干擾素、拉米夫定、阿德福韋酯、恩替卡韋、替比夫定等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

3.2.3建議在病毒的檢測(cè)臨界值水平對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測(cè)。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。應(yīng)注明不同干擾物質(zhì)對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)無干擾的最高限值。對(duì)于不易收集的干擾物質(zhì)濃度樣本可使用臨床模擬樣本進(jìn)行調(diào)節(jié)。

4.精密度
　　精密度的評(píng)價(jià)方法并無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同產(chǎn)品特征或企業(yè)的研究習(xí)慣進(jìn)行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體實(shí)驗(yàn)方法可以參考相關(guān)的國(guó)外或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評(píng)估的文件進(jìn)行。企業(yè)應(yīng)對(duì)每項(xiàng)精密度指標(biāo)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)的范圍等。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

4.1用于精密度評(píng)價(jià)的樣本濃度水平應(yīng)至少包含陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性三個(gè)水平。

4.2合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的連續(xù)檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如有條件，申請(qǐng)人應(yīng)選擇不同的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以對(duì)室間精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

5.基因混合型的研究

該部分研究主要包括兩個(gè)目的：一是申報(bào)試劑檢測(cè)不同濃度混合型的能力。申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)置不同濃度比例的混合型進(jìn)行驗(yàn)證。二是申報(bào)試劑在判讀結(jié)果時(shí)，是否能夠有效區(qū)分基因重組型和基因混合型。申請(qǐng)人應(yīng)設(shè)置不同濃度的基因重組型與不同混合比例的基因混合型進(jìn)行驗(yàn)證。

因理想的不同濃度比例基因混合型樣本在臨床單位中難以收集，申請(qǐng)人可以使用臨床模擬樣本進(jìn)行驗(yàn)證。該部分樣本建議用核酸測(cè)序明確樣本中包含的所有基因型序列，同時(shí)應(yīng)使用核酸定量的方法確定不同基因型的濃度。

如申報(bào)產(chǎn)品的結(jié)果判讀無法有效區(qū)分基因混合型與基因重組型，應(yīng)在產(chǎn)品說明書中進(jìn)行注明。

6.HBV核酸分離純化

病毒DNA提取主要有以下目的：富集目的基因濃度、保證目的基因序列的完整性、增加PCR模板溶液均一性、去除PCR抑制物，是決定PCR成敗的重要因素之一。企業(yè)應(yīng)對(duì)核酸提取的環(huán)節(jié)做詳細(xì)的驗(yàn)證。

（五）陽性判斷值或參考區(qū)間確定資料

陽性判斷值確定資料主要指對(duì)核酸檢測(cè)的Ct值進(jìn)行確認(rèn)，建議申請(qǐng)人對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認(rèn)。參考值范圍研究資料樣本來源應(yīng)考慮不同年齡、型別、地域等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。如存在參考值灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。如采用其他方法對(duì)陽性判斷值進(jìn)行確認(rèn)研究，應(yīng)說明這種方法的合理性。對(duì)于此類試劑，正常人群及其他患病人群中一般不應(yīng)檢出HBV基因型。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。   

（七）臨床試驗(yàn)

1.試驗(yàn)方法

乙型肝炎病毒基因分型核酸檢測(cè)試劑目前主要供臨床醫(yī)護(hù)人員對(duì)慢性乙型肝炎患者設(shè)置臨床治療方案提供參考依據(jù)。隨著乙型肝炎基因型與肝炎病情關(guān)系的研究工作不斷深入，研究方法不斷改進(jìn)，新的研究成果可能將被轉(zhuǎn)化應(yīng)用于臨床工作中。如乙型肝炎病毒基因分型核酸檢測(cè)試劑用于新的臨床用途，應(yīng)根據(jù)新的臨床用途特點(diǎn)設(shè)置具有針對(duì)性的臨床試驗(yàn)研究方案。

參比方法的選擇可以考慮以下幾方面：

1.1 如已有同類產(chǎn)品上市，可以選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。應(yīng)充分考慮已上市同類試劑的型別選擇、靶序列選擇、分析靈敏度等特性，確?？己嗽噭┡c申報(bào)試劑具有明確可比性。

1.2 申請(qǐng)人亦可采用核酸序列測(cè)定方法作為此類試劑臨床試驗(yàn)研究的參比方法，驗(yàn)證考核試劑檢測(cè)結(jié)果與核酸序列測(cè)定（測(cè)序）結(jié)果之間的一致性情況。臨床試驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹。

申請(qǐng)人應(yīng)提供以下關(guān)于測(cè)序部分的詳細(xì)試驗(yàn)資料，需有臨床試驗(yàn)單位簽章確認(rèn)：

1.2.1 測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

1.2.2 測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇，分子量、純度、功能性實(shí)驗(yàn)等資料。引物設(shè)計(jì)應(yīng)合理涵蓋考核試劑擴(kuò)增的靶核酸區(qū)段、位點(diǎn)、及所有突變類型。

1.2.3 對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最低檢測(cè)限的確認(rèn)，建議將所選測(cè)序方法與申報(bào)試劑的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對(duì)分析。

1.2.4 測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

1.2.5 提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)獲得國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局資質(zhì)認(rèn)可。建議申請(qǐng)人在選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)時(shí)，應(yīng)考慮試驗(yàn)機(jī)構(gòu)之間的地域代表性，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和對(duì)比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案，并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，同時(shí)方案中應(yīng)明確寫明對(duì)于對(duì)比試驗(yàn)研究中測(cè)定結(jié)果不符的樣本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)的第三方試劑或方法。

4.臨床試驗(yàn)對(duì)象選擇

4.1基因型方面的考慮

HBV病毒為DNA病毒，其基因具有顯著的多樣性，不同的地區(qū)和民族，HBV流行的基因型不同。境內(nèi)流行的HBV基因型主要為B型、C型，部分地區(qū)存在少數(shù)D 型，以及重組型基因B/C型，B/D型，C/D型等。而且，HBV基因型具有一定的地域差異，不同地區(qū)流行的HBV基因型也不盡相同。因此，在選擇HBV感染者病例時(shí)，首先應(yīng)根據(jù)HBV流行的情況，選擇能代表我國(guó)不同地區(qū)流行基因型的HBV感染者病例，以對(duì)試劑檢測(cè)我國(guó)流行的HBV病毒的能力進(jìn)行客觀科學(xué)的評(píng)價(jià)，選擇的基因型應(yīng)包括上述三種主要的基因型。

4.2病例選擇及樣本類型

應(yīng)涵蓋注冊(cè)申報(bào)試劑所聲稱的所有基因型，應(yīng)選擇部分干擾樣本（交叉反應(yīng)樣本），比較干擾組和病例組結(jié)果，以便對(duì)申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能做出科學(xué)的分析。臨床試驗(yàn)所需樣本總例數(shù)不少于500例，其干擾組例數(shù)的選擇以不超過總臨床樣本數(shù)的10%為宜。對(duì)于B型及C型基因型臨床樣本，應(yīng)滿足每種基因型不少于200例臨床樣本；對(duì)于D型基因型及其他基因型臨床樣本，建議每種不少于30例陽性病例。每種基因型臨床樣本應(yīng)來源于乙型肝炎病毒核酸檢測(cè)陽性的患者。如注冊(cè)申報(bào)試劑中包含其他基因型，應(yīng)結(jié)合這部分基因型在我國(guó)的流行病學(xué)特點(diǎn)，臨床應(yīng)用情況等綜合因素，對(duì)其臨床有效性進(jìn)行科學(xué)評(píng)估。

在樣本選擇時(shí)，應(yīng)注重患者來源的不同地域性，不同病情進(jìn)展，不同藥物治療方案等。對(duì)于干擾組樣本的選擇，應(yīng)考慮到在檢測(cè)過程中容易產(chǎn)生干擾，可能造成假陽性/假陰性的情況，以從臨床角度考察其分析特異性。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、不同基因型陰性/陽性符合率等。對(duì)于本類產(chǎn)品對(duì)比試驗(yàn)的等效性研究，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表χ2檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果有無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有不一致的樣本，如有必要，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑或參考方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可

能結(jié)果進(jìn)行分析。

7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述：

7.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

7.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選擇、臨床試驗(yàn)主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹；

7.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；

7.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等；

7.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

7.2臨床試驗(yàn)具體情況

7.2.1臨床試驗(yàn)所用產(chǎn)品的名稱、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息，以及對(duì)比試驗(yàn)產(chǎn)品的注冊(cè)情況；

7.2.2對(duì)各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的病例數(shù)、年齡分布情況進(jìn)行綜合分析，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；

7.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品測(cè)量值的抽查結(jié)果評(píng)估；

7.2.4具體試驗(yàn)過程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長(zhǎng)期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。

7.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

7.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過程中是否涉及對(duì)方案的修改；

7.3.2陽性符合率、陰性符合率、總體符合率；

7.3.3以交叉多格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行多格表χ2檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。應(yīng)明確將每種基因型單獨(dú)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

7.4討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床試驗(yàn)有無特別說明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

擬定產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說明》的相關(guān)規(guī)定。申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下,根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、前期臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果,依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求編寫。內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標(biāo)和檢驗(yàn)方法。第三類產(chǎn)品技術(shù)要求中還應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求。

附錄中應(yīng)將待測(cè)靶基因的基因位點(diǎn)、引物/探針設(shè)計(jì)及來源、參考品設(shè)置、來源及驗(yàn)證情況、各種酶的來源、特性及驗(yàn)證等重點(diǎn)內(nèi)容予以明確。

乙型肝炎病毒基因分型檢測(cè)試劑的產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限等。陽性參考品主要考察對(duì)試劑盒覆蓋范圍內(nèi)不同基因的檢測(cè)符合性，陰性參考品則重點(diǎn)對(duì)申報(bào)試劑的分析特異性進(jìn)行驗(yàn)證。

（九）注冊(cè)檢驗(yàn)

根據(jù)《辦法》要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類產(chǎn)品應(yīng)該在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊(cè)檢驗(yàn)。對(duì)于已經(jīng)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)項(xiàng)目，在注冊(cè)檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)采用相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行檢驗(yàn)；對(duì)于目前尚無國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的項(xiàng)目，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。   

（十）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求。境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯應(yīng)準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，明確乙

型肝炎病毒（HBV）基因分型檢測(cè)試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說明書編制。

1.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1 試劑盒用于體外定性檢測(cè)已明確為乙型肝炎病毒核酸陽性患者的血清、血漿等樣本中乙型肝炎病毒基因型。輔助醫(yī)療專業(yè)人員了解病人的乙型肝炎病毒基因型感染情況以及確定適當(dāng)?shù)闹委煼椒ā?/span>

1.2 乙型肝炎病毒基因分型試劑的基因型應(yīng)至少包括B型、C型、D型，如果申請(qǐng)人略去上述任意一種推薦的基因型，應(yīng)給出合理的解釋。

1.3 適用人群：確診的慢性乙型肝炎病毒感染者。

1.4 簡(jiǎn)要介紹乙型肝炎病毒基因型的特征，包括不同基因型的特征、不同基因型常見亞型、不同基因型在地域及人群中的分布情況、不同基因型在臨床的應(yīng)用特點(diǎn)。

1.5 強(qiáng)調(diào)該試劑盒檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為治療藥物調(diào)整的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等因素對(duì)患者治療進(jìn)行綜合判斷。

2.【檢驗(yàn)原理】

2.1 對(duì)試劑盒檢測(cè)能夠覆蓋的所有被檢測(cè)的基因型進(jìn)行詳細(xì)描述（靶序列長(zhǎng)度及來源區(qū)段、基因型類型及相關(guān)特征等），對(duì)引物及探針設(shè)計(jì)簡(jiǎn)介、不同樣品反應(yīng)管組合、對(duì)照品設(shè)置及熒光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行逐項(xiàng)介紹。

2.2 核酸提取純化的方法、原理等。

2.3 試劑盒技術(shù)原理的詳細(xì)介紹，建議結(jié)合適當(dāng)圖示進(jìn)行說明。如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。

3.【主要組成成分】

3.1 詳細(xì)說明試劑盒內(nèi)各組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度、穩(wěn)定性等信息，陰性/陽性對(duì)照品（或質(zhì)控品）可能含有生物源性物質(zhì)的組分，應(yīng)說明其生物學(xué)來源、活性及其他特性；說明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2 試劑盒中如不包含該項(xiàng)檢測(cè)必需的組分，說明書中應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱、注冊(cè)證號(hào)（如有）及其他相關(guān)信息。

3.3 如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱、注冊(cè)證號(hào)（如有）以及配套儀器等詳細(xì)信息。

4.【適用機(jī)型】

注明所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。

5.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說明試劑盒的效期穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲(chǔ)存條件及效期。

6.【樣本要求】

6.1 樣本收集要求：如采集時(shí)間、采集順序等，是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。結(jié)合臨床需要并參照慢性乙型肝炎防治指南（現(xiàn)行版）相關(guān)要求。

6.2 血液樣本應(yīng)當(dāng)說明對(duì)采血管及抗凝劑的要求：明確樣本類型、采血管和抗凝劑，其他樣本應(yīng)說明樣本采集、處理及保存方式。

6.3 樣本處理、運(yùn)送及保存：對(duì)血液樣本離心條件的要求，核酸提取前的預(yù)處理、運(yùn)送條件、保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的要求。如有需要應(yīng)對(duì)高于檢測(cè)范圍的樣本稀釋方法進(jìn)行規(guī)定。

7.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟：

7.1 試劑準(zhǔn)備及配制方法、注意事項(xiàng)。

7.2 詳述待測(cè)樣本、質(zhì)控品核酸提取的條件、步驟及注意事項(xiàng)。

7.3 核酸提取/純化方法的詳細(xì)介紹。

7.4 擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

7.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.6 儀器設(shè)置：特殊參數(shù)、結(jié)合探針的熒光素標(biāo)記情況對(duì)待測(cè)基因及內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇。

7.7 基線、循環(huán)閾值（Ct值）的選擇方法。

8.【陽性判斷值或者參考區(qū)間】

該類產(chǎn)品用于定性檢測(cè)，Cut-off值是檢測(cè)試劑有效區(qū)分檢測(cè)結(jié)果陽性和陰性的標(biāo)準(zhǔn)，如產(chǎn)品檢測(cè)原理為熒光PCR法。Cut-off的描述包括基線的確定方法和循環(huán)閾值（Ct值）的要求。除Ct值要求外，對(duì)于接近Cut-off值的弱陽性結(jié)果或者接近Cut-off值的陰性結(jié)果建議結(jié)合擴(kuò)增結(jié)果的S形曲線對(duì)結(jié)果進(jìn)行判斷。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合陽性對(duì)照、陰性對(duì)照以及反應(yīng)管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果（Ct值），對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。如存在檢測(cè)灰區(qū)，應(yīng)對(duì)灰區(qū)結(jié)果的處理方式一并詳述。建議將不同結(jié)果的典型性圖譜納入說明書中，便于用戶對(duì)結(jié)果的讀取。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

10.1 該產(chǎn)品僅用于乙型肝炎病毒核酸檢測(cè)陽性患者的臨床樣本檢測(cè)。

10.2 該產(chǎn)品僅用于不同基因型的定性檢測(cè)，不適用定量檢測(cè)。

10.3該產(chǎn)品未包含全部乙型基因型別。該產(chǎn)品僅用于產(chǎn)品說明書預(yù)期用途所包含的已知基因型的檢測(cè)，不適用其他基因型及未知基因型的檢測(cè)。因此，當(dāng)本試劑盒檢測(cè)結(jié)果為陰性時(shí)，并不能排除被檢測(cè)者帶有乙型肝炎病毒的其他基因位點(diǎn)。

10.4 如申報(bào)產(chǎn)品因產(chǎn)品原理導(dǎo)致無法對(duì)乙型肝炎病毒不同基因型混合樣本和重組型樣本進(jìn)行區(qū)別，應(yīng)在產(chǎn)品說明書中進(jìn)行注釋，幫助醫(yī)療專業(yè)人員對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行客觀認(rèn)識(shí)。

10.5 模板DNA 質(zhì)量將影響該產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果。模板DNA 的質(zhì)量可能受樣本來源、采集過程、運(yùn)輸條件、樣本處理等因素影響，同時(shí)也受DNA提取方法、PCR 儀類型、操作環(huán)境以及當(dāng)前分子生物學(xué)技術(shù)的局限性等的限制，可能導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性和假陰性的檢測(cè)結(jié)果。使用者須了解檢測(cè)過程中可能存在的潛在風(fēng)險(xiǎn)。

10.6 該產(chǎn)品以乙型肝炎病毒基因上的特定DNA 片段為檢測(cè)靶標(biāo)，如試劑盒引物與探針結(jié)合區(qū)出現(xiàn)基因突變，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果異常，將影響檢測(cè)結(jié)果解釋。     

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

詳述以下性能指標(biāo)：

11.1最低檢出限：說明試劑不同樣本類型及不同基因型的最低檢出限，簡(jiǎn)要介紹最低檢出限的確定方法以及對(duì)最低檢出限驗(yàn)證所采用的基因型。如不同基因型之間最低檢出限不同，應(yīng)分別列出。

11.2 精密度/重復(fù)性：精密度參考品的組分、濃度及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)、評(píng)價(jià)結(jié)果。

11.3 特異性：

11.3.1交叉反應(yīng)：

易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他病原體以及乙型肝炎病毒其他基因型的驗(yàn)證情況，建議以列表的方式表示經(jīng)過交叉反應(yīng)驗(yàn)證的病原體名稱、型別、濃度等信息。

11.3.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

11.3.3藥物影響：常用抗病毒藥物、干擾素等對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如未進(jìn)行相關(guān)研究也應(yīng)提供相關(guān)警示說明。

11.3.4對(duì)比試驗(yàn)研究（如有）：簡(jiǎn)要介紹對(duì)比試劑（方法）的信息、所采用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法及統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。

12.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1 如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在

感染性的警告。

12.2 臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

三、名詞解釋

基因型：是指根據(jù)不同個(gè)體基因序列之間的規(guī)律性差異而分成的不同類型，用來描述基因本身的特征?；蛐头治隹设b定個(gè)體或病毒毒株之間的差異。

四、起草單位

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。