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本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對基于細(xì)胞熒光原位雜交法（Fluorescence In Situ Hybridization，FISH）的人類染色體異常檢測試劑注冊申報資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則所述染色體異常的類型包括染色體數(shù)目異常、結(jié)構(gòu)異常（包括異位，倒位導(dǎo)致的基因斷裂和融合）、擴(kuò)增、缺失等，例如，產(chǎn)前羊水細(xì)胞中的染色體數(shù)目異常，白血病患者骨髓細(xì)胞中的BCR/ABL基因融合等。

檢測人類染色體異常的方法有染色體核型分析、原位雜交法、PCR法和高通量測序法等，不同方法在檢測染色體異常類型、片段大小、操作要求等方面具有不同特點。本指導(dǎo)原則適用于需進(jìn)行注冊審批方可上市的采用熒光原位雜交法檢測人類細(xì)胞樣本中染色體異常的檢測試劑。熒光原位雜交法是指根據(jù)堿基互補配對原則，在與目標(biāo)DNA配對的核酸片段上標(biāo)記熒光染料（探針），該探針與待檢樣本中相應(yīng)的核酸片段在一定條件下特異結(jié)合（雜交），形成雙鏈核酸，借助于熒光顯微鏡觀察并記錄形成雜交雙鏈的類型、數(shù)量和所處染色體區(qū)帶位置，從而判斷待檢樣本中是否存在染色體異常的檢測方法。本指導(dǎo)原則是基于熒光原位雜交法撰寫而成，對于顯色原位雜交法和銀增強(qiáng)原位雜交法等亮視野原位雜交法不適用。

本指導(dǎo)原則適用樣本類型為人類細(xì)胞樣本，不適用于在石蠟包埋的細(xì)胞學(xué)和組織學(xué)切片上進(jìn)行檢測的試劑和微生物檢測試劑。

本文是針對采用熒光原位雜交法檢測人類細(xì)胞樣本中染色體異常的檢測試劑的通用指導(dǎo)原則，申請人應(yīng)結(jié)合具體產(chǎn)品的特點進(jìn)行注冊申報。如果申報產(chǎn)品有具體指導(dǎo)原則，應(yīng)按照執(zhí)行。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品，包括申報資料中部分項目要求，其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊申報資料要求

注冊申報資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱2014年第44號公告）的相關(guān)要求。內(nèi)容主要包括：

（一）綜述資料

1.產(chǎn)品預(yù)期用途。描述產(chǎn)品的預(yù)期用途，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床背景情況。說明檢測的位點和靶序列（Target Sequence，TS），包括靶序列的長度、異常類型和特異性信息。說明相關(guān)的臨床適應(yīng)癥，該異常在適應(yīng)癥中的發(fā)生情況和頻率，適應(yīng)癥的發(fā)生率、適用人群等。說明具體臨床意義，例如：是否用于診斷、分型、治療方案選擇、預(yù)后判斷、微量殘留病監(jiān)測等。介紹相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。

2.產(chǎn)品描述。描述產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，包括雜交反應(yīng)和信號結(jié)果。描述主要原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程，參考品的制備和確認(rèn)方法。

3.有關(guān)生物安全性方面的說明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價。

5.其他。包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。對同類產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法、檢測位點、樣本類型、熒光信號標(biāo)記及臨床應(yīng)用等進(jìn)行對比分析，以闡明申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的優(yōu)勢和局限性。對于新研制的體外診斷試劑產(chǎn)品，需要提供被測物與預(yù)期臨床適應(yīng)癥之間關(guān)系的文獻(xiàn)資料。

（二）主要原材料研究資料

應(yīng)提供主要原材料的來源選擇、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等研究資料。如主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須穩(wěn)定可控；如主要原材料為購自其他供應(yīng)商，應(yīng)詳述每一原材料的外購方來源，外購方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報告或性能指標(biāo)證書，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗資料。

1.探針：明確探針類型（序列特異性探針、著絲粒探針等），提供該探針序列的選擇依據(jù)，明確結(jié)合位點的序列長度和染色體區(qū)帶位置，可采用FISH分析結(jié)合染色體顯帶的方法進(jìn)行定位。如檢測位點存在多種異常形式（例如斷裂點不同），應(yīng)合理設(shè)計探針避免漏檢。探針結(jié)合位點的基因組圖譜位置應(yīng)具有特異性，檢索基因組數(shù)據(jù)庫，如果發(fā)現(xiàn)靶序列與基因組其他區(qū)域的序列具有同源性，應(yīng)進(jìn)行評估，盡量避免交叉雜交信號的出現(xiàn)。應(yīng)對探針的濃度、純度及標(biāo)記的熒光信號基團(tuán)進(jìn)行核實，并進(jìn)行功能性試驗驗證其檢測性能。探針如為企業(yè)自己生產(chǎn)，應(yīng)描述克隆培養(yǎng)、鑒定、熒光標(biāo)記和純化等過程；如為外購，應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明。

2.熒光染料：描述熒光染料的名稱和詳細(xì)特征，例如其最大發(fā)射/吸收波長，標(biāo)記后持續(xù)被激發(fā)光源照射時的抗淬滅能力等。

3.雜交緩沖液：描述配方組成和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，確認(rèn)其可提供合適的離子和雜交環(huán)境。

4.背景信號封閉劑：描述采取的降低背景信號的方法，如果采用背景信號封閉劑（例如：人 Cot-1 DNA），應(yīng)確認(rèn)其封閉效果。

5.細(xì)胞核復(fù)染劑：一般包含二脒基苯基吲哚（DAPI）和抗褪色劑，用于細(xì)胞核DNA的染色，同時防止熒光信號淬滅。描述配方組成和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

6.質(zhì)控品（如有）：建議試劑盒中包含經(jīng)驗證的質(zhì)控品，以利于控制FISH試驗的質(zhì)量，對試劑制備和雜交過程進(jìn)行質(zhì)控，并可統(tǒng)一結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)，輔助改善實驗室間精密度和準(zhǔn)確度。質(zhì)控品可為質(zhì)控玻片，也可為經(jīng)固定的細(xì)胞懸液。如試劑盒中包含質(zhì)控品，應(yīng)詳述制備和確認(rèn)方法。質(zhì)控品樣本來源可為已知結(jié)果的臨床樣本或細(xì)胞系，各質(zhì)控品的結(jié)果要求應(yīng)經(jīng)過驗證，予以明確。

7.企業(yè)參考品：應(yīng)包含陽性參考品、陰性參考品、特異性參考品和精密度參考品，詳細(xì)說明參考品的樣本類型、組成、制備和保存情況。參考品應(yīng)經(jīng)染色體核型分析或其他合理方法確認(rèn)其陰陽性。陽性參考品應(yīng)涵蓋主要染色體異常信號類型，陰性參考品主要驗證干擾和交叉反應(yīng)的情況，特異性參考品驗證探針雜交位點的特異性，精密度參考品驗證產(chǎn)品重復(fù)性。陽性參考品、陰性參考品和精密度參考品可采用臨床樣本或細(xì)胞系，特異性參考品應(yīng)采用處于中期分裂相的正常外周血（或其培養(yǎng)液）淋巴細(xì)胞。如產(chǎn)品適用多種樣本類型，且各樣本類型間存在顯著性能差異，需分別設(shè)置企業(yè)參考品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

應(yīng)描述主要生產(chǎn)工藝及確定依據(jù)，詳述探針標(biāo)記、工作液配制、檢驗、分裝、包裝等工序以及各個步驟的質(zhì)量關(guān)鍵控制點，可用流程圖表示。

申請人應(yīng)建立適當(dāng)反應(yīng)體系，以獲得準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。如果產(chǎn)品涉及樣本處理和檢測過程的不同方案，應(yīng)對各方案的一致性予以驗證。應(yīng)對下述內(nèi)容進(jìn)行研究，評價指標(biāo)包括探針信號強(qiáng)度、雜交效率、交叉雜交、非特異性結(jié)合及背景強(qiáng)度。

1.樣本要求

1.1樣本采集：研究確定樣本采集時間（例如特定孕周范圍內(nèi)），最佳/最小采集體積和檢測用樣本量。如產(chǎn)品適用不同樣本類型（例如：羊水細(xì)胞、絨毛膜細(xì)胞、臍血細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、外周血細(xì)胞，新鮮樣本或培養(yǎng)樣本），應(yīng)分別予以研究。明確檢測的細(xì)胞階段，例如：間期和/或中期。

1.2樣本固定和制片：應(yīng)對低滲時間、預(yù)固定時間、滴片細(xì)胞密度等進(jìn)行研究。如產(chǎn)品適用不同樣本或玻片類型，例如培養(yǎng)和未培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞懸液玻片、細(xì)胞涂片和經(jīng)流式細(xì)胞儀分選的細(xì)胞玻片，應(yīng)分別進(jìn)行研究。

1.3 玻片預(yù)處理：對預(yù)處理條件進(jìn)行研究，如需蛋白酶消化，應(yīng)對消化條件進(jìn)行重點研究，優(yōu)化蛋白酶的用量和消化時間，盡量減少消化不充分造成的非特異性結(jié)合，同時避免消化過強(qiáng)造成DNA損失。如產(chǎn)品適用不同樣本或玻片類型，應(yīng)分別進(jìn)行研究。

2.試劑用量：對探針等各試劑成分的用量進(jìn)行優(yōu)化。采用不同用量進(jìn)行試驗，通過平衡全部探針雜交信號強(qiáng)度和非特異信號/背景強(qiáng)度，選取最佳使用量。

3.反應(yīng)條件：雜交過程包括變性（樣本和探針DNA單鏈化）、雜交、洗滌和細(xì)胞核復(fù)染，過程中的各反應(yīng)條件對于提高雜交效率，減少交叉雜交至關(guān)重要。優(yōu)化變性溫度和時間，雜交溫度和時間，研究不同雜交儀或替代儀器的適用性，研究雜交后洗滌條件（主要包括洗滌液組分、洗滌溫度和洗滌時間）。試劑盒中包含多種探針時，需對每種探針均進(jìn)行雜交反應(yīng)條件優(yōu)化，最終選擇試劑的最佳反應(yīng)條件。

4.計數(shù)細(xì)胞量：提供結(jié)果判讀需要計數(shù)的細(xì)胞量及確定依據(jù)。計數(shù)細(xì)胞量和適用樣本類型、預(yù)期用途、試劑的雜交效率、精密度、最低檢測限等因素有關(guān)。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)使用多批產(chǎn)品進(jìn)行研究，建立穩(wěn)定可靠的性能指標(biāo)。需提交在產(chǎn)品研制和成品驗證階段對試劑盒進(jìn)行的所有性能評價的研究資料，包括方案設(shè)計、研究方法、材料和設(shè)備、試驗數(shù)據(jù)（包括代表性彩色圖片）和結(jié)果統(tǒng)計分析等詳細(xì)資料。建議著重對以下性能指標(biāo)進(jìn)行研究：

1.探針敏感性

試劑中探針結(jié)合靶序列的能力，也稱為雜交效率?？赏ㄟ^研究靶序列被檢測到的概率進(jìn)行評估，例如：分析n個細(xì)胞中的2n條染色體，顯示各熒光信號的染色體比例應(yīng)不低于95%，可采用處于中期分裂相的正常外周血（或其培養(yǎng)液）淋巴細(xì)胞進(jìn)行評估。

2.探針特異性

試劑區(qū)分樣本中靶序列與其他序列的能力。可通過研究雜交信號是否特異結(jié)合到靶序列進(jìn)行評估，例如：分析n個細(xì)胞中的2n條染色體，特異雜交到染色體正確位置的比例應(yīng)不低于95%，可采用處于中期分裂相的正常外周血（或其培養(yǎng)液）淋巴細(xì)胞進(jìn)行檢測，結(jié)合顯帶技術(shù)進(jìn)行觀察。

如果出現(xiàn)交叉雜交，應(yīng)考慮靶序列與交叉雜交序列的同源性程度，是否存在其他相似染色體異常類型等問題。應(yīng)按照下述規(guī)則報告交叉雜交的結(jié)果：

A.在靶序列之外其他位置檢測到信號的細(xì)胞比例；

B.每個細(xì)胞/每份樣本中不同交叉雜交染色體/區(qū)域的數(shù)量；

C.使用標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)命名，確定所有交叉雜交的染色體位置，并描述這些非靶序列。

3.陰、陽性符合率

采用多例已知結(jié)果的臨床樣本進(jìn)行制片檢測。陽性樣本應(yīng)包括靶序列的所有染色體異常類型/信號類型。陰性樣本應(yīng)包括野生型和易混淆異常。陰、陽性樣本的檢測結(jié)果均應(yīng)在各自的閾值范圍內(nèi)。

4.精密度

研究試劑在各種條件下，不同染色體異常類型和比例（尤其是醫(yī)學(xué)相關(guān)水平附近）的精密度。應(yīng)對批內(nèi)和批間差異進(jìn)行研究，考慮運行內(nèi)、運行間、日間、人員間、實驗室間等因素對檢測結(jié)果的影響，檢測結(jié)果應(yīng)一致或者變異系數(shù)（CV）在合理范圍內(nèi)。

5.最低檢出限

試劑檢測陽性信號細(xì)胞占規(guī)定計數(shù)細(xì)胞的最小百分比。最低檢出限與計數(shù)細(xì)胞總數(shù)密切相關(guān)，可通過設(shè)置不同計數(shù)細(xì)胞量，確定產(chǎn)品的最低檢出限?？刹捎媒?jīng)合理方法確定陽性細(xì)胞比例的不同樣本，或采用陰、陽性細(xì)胞按不同比例混合的方法，設(shè)置多個陽性細(xì)胞比例的梯度進(jìn)行研究。

6.干擾物質(zhì)

說明樣本中潛在的干擾物質(zhì)，樣本處理和制片過程中的干擾物質(zhì)，采集過程中可能的其它細(xì)胞污染等，研究干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

如果產(chǎn)品適用多種樣本類型，應(yīng)進(jìn)行樣本適用性研究，應(yīng)盡量采用臨床樣本，分別提供每種樣本類型的性能評估資料。

（五）陽性判斷值確定資料

對于此類試劑，陽性判斷值即為能夠區(qū)分染色體異常與否的閾值。應(yīng)入組已知靶序列異常狀態(tài)的臨床樣本，包括陽性、陰性和陽性判斷值附近的樣本，研究預(yù)設(shè)陽性判斷值，建議采用受試者工作特征曲線（ROC）的分析方法。申請人應(yīng)采用臨床樣本對預(yù)設(shè)陽性判斷值進(jìn)行驗證。不同樣本類型可能會導(dǎo)致陽性判斷值的差異，如果試劑盒適用不同的樣本類型，應(yīng)對所有樣本類型的陽性判斷值進(jìn)行驗證。如果涉及不同染色體異常類型和/或信號類型，可能需要設(shè)置兩個或多個陽性判斷值，此時應(yīng)分別進(jìn)行研究和驗證。

（六）穩(wěn)定性研究資料

1.試劑穩(wěn)定性：申請人應(yīng)充分考慮產(chǎn)品在儲存、運輸和使用過程中的不利條件，進(jìn)行實時穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性和光照穩(wěn)定性的研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、研究數(shù)據(jù)及結(jié)論。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

2.樣本穩(wěn)定性：申請人應(yīng)充分考慮樣本采集、處理、運輸、儲存等各個階段的條件，研究確定樣本的保存條件和時間，包括采集后樣本保存和處理后細(xì)胞、玻片保存。雜交后玻片的信號會隨著溫度升高、時間延長而減弱，應(yīng)研究在何種保存條件和時間內(nèi)熒光信號強(qiáng)度不受影響。

（七）臨床評價資料

臨床試驗總體要求及臨床試驗資料的內(nèi)容應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則的規(guī)定，申請人應(yīng)在符合要求的臨床機(jī)構(gòu)，在滿足臨床試驗最低樣本量要求的前提下，根據(jù)產(chǎn)品臨床預(yù)期用途、相關(guān)疾病的流行率和統(tǒng)計學(xué)要求，制定能夠證明其臨床性能的臨床試驗方案，同時最大限度地控制試驗誤差，提高試驗質(zhì)量并對試驗結(jié)果進(jìn)行科學(xué)合理的分析。

1.臨床試驗機(jī)構(gòu)及人員

申請人應(yīng)當(dāng)選定不少于3家（含3家）已備案的醫(yī)療器械臨床試驗機(jī)構(gòu)，按照有關(guān)規(guī)定開展臨床試驗。臨床試驗機(jī)構(gòu)應(yīng)具備完善的細(xì)胞遺傳學(xué)檢測能力，操作者、閱片者應(yīng)在熒光原位雜交技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域具有豐富經(jīng)驗。不同產(chǎn)品對臨床試驗機(jī)構(gòu)和操作人員的要求可能不同，申請人應(yīng)綜合產(chǎn)品預(yù)期用途進(jìn)行考慮，例如：基于產(chǎn)前診斷用途，臨床研究機(jī)構(gòu)應(yīng)為已取得產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，機(jī)構(gòu)和人員應(yīng)遵循《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》和《母嬰保健專項技術(shù)服務(wù)許可及人員資格管理辦法》。

2.臨床試驗方案

2.1臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗方案。各臨床試驗機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機(jī)構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報機(jī)構(gòu)的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉試驗進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

2.2對于臨床樣本應(yīng)在方案中明確采集時間、樣本類型和樣本質(zhì)量的要求，該類要求應(yīng)與產(chǎn)品說明書中相應(yīng)內(nèi)容一致。

2.3試驗方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例在被排除出臨床試驗時都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。

2.4臨床試驗過程中，各家機(jī)構(gòu)應(yīng)按照說明書描述，遵循一致的判讀標(biāo)準(zhǔn)，包括細(xì)胞選擇、判讀分析和結(jié)果解釋等。

2.5如需提供隨訪資料，應(yīng)包括但不限于如下內(nèi)容：隨訪操作及記錄人員、復(fù)核人員、隨訪方式、隨訪項目、判定依據(jù)、隨訪時間周期及間隔、隨訪終點等。

3.試驗方法

3.1申請人應(yīng)綜合考慮產(chǎn)品預(yù)期用途，反應(yīng)原理和檢測方法等因素，選擇合理的臨床試驗方法。建議采用染色體核型分析和跟蹤隨訪等金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究，評價試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）的臨床敏感性和臨床特異性，從而證明其臨床性能滿足預(yù)期用途的要求。染色體數(shù)目檢測試劑，染色體核型分析可辨識的其他染色體異常檢測試劑，均應(yīng)采用上述方法進(jìn)行臨床試驗。

對于適用樣本類型難以培養(yǎng)獲得中期分裂相的試劑，染色體核型分析難以辨識的染色體異常檢測試劑，可選擇臨床試驗機(jī)構(gòu)已建立的其他臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床試驗，例如：疾病診斷、參考方法等。應(yīng)詳細(xì)描述所采用的臨床參考標(biāo)準(zhǔn)，確保其選擇的合理性。

3.2申請人應(yīng)結(jié)合具體產(chǎn)品的預(yù)期用途進(jìn)行臨床試驗，該類產(chǎn)品可作為胎兒遺傳性疾病、白血病等疾病的診斷方法之一；如果申報產(chǎn)品具有指導(dǎo)用藥的預(yù)期用途，應(yīng)提供指導(dǎo)用藥相關(guān)證據(jù)；如申報產(chǎn)品具有治療監(jiān)測、預(yù)后判定等預(yù)期用途，應(yīng)設(shè)計相應(yīng)試驗方案，例如治療前后的跟蹤研究，必要時進(jìn)行隨訪研究等。如申報產(chǎn)品有具體指導(dǎo)原則，應(yīng)參照執(zhí)行。

4.受試者選擇及陽性例數(shù)

臨床試驗應(yīng)以申報產(chǎn)品適用人群作為研究對象，疾病類型應(yīng)涵蓋申報產(chǎn)品聲稱的疾病種類，例如疾病的不同類型和病程分期等，應(yīng)納入一定數(shù)量的醫(yī)學(xué)決定水平附近樣本。對于陰性病例的選擇，應(yīng)考慮驗證干擾因素和交叉反應(yīng)的需要，應(yīng)包括易混淆疾病、其他染色體區(qū)域和其他異常類型等，以從臨床角度考察其分析特異性。

明確給出樣本量的確定依據(jù)，建議從統(tǒng)計學(xué)原則和陽性樣本獲得可行性角度綜合計算陽性例數(shù)，臨床試驗陽性樣本量原則上應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)要求。如產(chǎn)品檢測多個靶序列，每個靶序列應(yīng)單獨估算陰性/陽性例數(shù)；如申報產(chǎn)品檢測的某一靶序列異常形式存在差異且均具有臨床意義（例如主要斷裂點和次要斷裂點），每種異常形式均應(yīng)有一定量的陽性例數(shù)。

若產(chǎn)品適用于多種細(xì)胞樣本類型，應(yīng)對所有樣本類型分別進(jìn)行臨床驗證。

5.統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法與指標(biāo)，如靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度及其95%置信區(qū)間等。常選擇交叉四格表的形式總結(jié)該檢測結(jié)果，采用kappa檢驗驗證檢測結(jié)果的一致性，同時給出一致性檢驗的結(jié)果。在臨床試驗方案中應(yīng)明確統(tǒng)計檢驗假設(shè)，即評價考核試劑與參比方法是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

應(yīng)詳細(xì)描述不一致的檢測結(jié)果，在方案中明確是否需進(jìn)一步復(fù)測或確認(rèn)，并對不一致原因進(jìn)行分析。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及指導(dǎo)原則的規(guī)定。對于此類試劑，性能指標(biāo)主要包括：外觀、熒光信號強(qiáng)度、敏感性、特異性、陽性符合率、陰性符合率、精密度等。如果申報試劑已有適用的國家參考品/標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布，則申請人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測要求。

（九）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)和指導(dǎo)原則的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書一致，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致。下面對基于細(xì)胞熒光原位雜交法的人類染色體異常檢測試劑說明書的重點內(nèi)容進(jìn)行說明。

1.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

1.1說明產(chǎn)品的預(yù)期用途，描述樣本類型、檢測位點和異常類型。

例如：本產(chǎn)品用于檢測羊水細(xì)胞中的13、18和21號染色體的數(shù)目。本產(chǎn)品用于定性檢測白血病患者骨髓樣本中的BCR/ABL融合基因。

1.2說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥及背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法。應(yīng)包括對適用人群特征的介紹，例如高危人群，臨床疑似或已診斷患有某疾病的人群。

1.3 根據(jù)產(chǎn)品預(yù)期用途，進(jìn)行合理限制，例如：本產(chǎn)品僅檢測靶向染色體數(shù)目異常，不能檢測其他染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常。

1.4本檢測結(jié)果僅供臨床參考，如需確診請結(jié)合臨床癥狀及其他檢測手段，不得作為臨床診斷或排除的唯一標(biāo)準(zhǔn)。

2.【檢測原理】

詳細(xì)說明產(chǎn)品的檢測原理，應(yīng)包括探針、熒光信號標(biāo)記和結(jié)果觀察等信息，建議結(jié)合文字和圖示對探針類型、長度及位點進(jìn)行描述。

3.【主要組成成分】

3.1說明試劑盒包含組分的名稱、數(shù)量、比例或濃度等信息，應(yīng)包括探針信息和質(zhì)控品（如有）的樣本信息。說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2試劑盒中不包含但對該項檢測必需的組分，應(yīng)列出相關(guān)試劑和儀器的名稱，質(zhì)控品（如適用）的名稱與貨號，化學(xué)制劑的純度和濃度（如適用），儀器的配置和功能要求，耗材的規(guī)格（材質(zhì)）要求。

4.【儲存條件及有效期】

對試劑的儲存條件、有效期、開瓶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)限制等信息做詳細(xì)介紹，應(yīng)包括避光的要求。如試劑盒包含質(zhì)控品還應(yīng)在此處明確質(zhì)控品的穩(wěn)定性。應(yīng)注明生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期。

5.【適用儀器】

明確配套熒光顯微鏡的配置要求，應(yīng)具備合適放大倍數(shù)的目鏡、物鏡和油鏡，具備相應(yīng)激發(fā)波長和發(fā)射波長的濾片組/濾塊。

6.【樣本要求】

6.1樣本的類型和采集：明確適用樣本類型，采集時間和采集體積，所用抗凝劑（如適用）。應(yīng)明確說明在取樣過程中如何避免被其他細(xì)胞或外源DNA污染。如需培養(yǎng)，應(yīng)說明細(xì)胞培養(yǎng)的具體方式。

6.2樣本的穩(wěn)定性：明確樣本采集后和處理后（固定細(xì)胞懸液和/或玻片）的保存條件和保存時間。

7.【檢驗方法】

7.1試劑配制：描述方法步驟，配制后的保存條件和有效期，試劑的反復(fù)使用次數(shù)，何種情況下即表明試劑變質(zhì)，DAPI等致癌物的操作注意事項等。

7.2樣本處理及玻片制備：詳述低滲、固定、滴片、老化、預(yù)處理等步驟，應(yīng)與前期研究資料一致。不同樣本或玻片類型可能操作不同，應(yīng)分別予以描述。

7.3變性、雜交、洗滌、復(fù)染：詳述操作步驟，包括處理時間、溫度、注意事項等內(nèi)容。

7.4玻片儲存：說明在何種保存條件和時間內(nèi)熒光信號強(qiáng)度不受影響。

7.5觀察和結(jié)果分析：

描述可讀取樣本玻片，例如：探針雜交信號應(yīng)明亮、清晰、易分辨，背景應(yīng)為黑色，無點狀或朦朧熒光。

描述可讀取細(xì)胞，例如：細(xì)胞分布合理，無重疊，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，邊界清晰等。

細(xì)胞計數(shù)：計數(shù)一定數(shù)量的細(xì)胞核，調(diào)焦找到每個核內(nèi)的所有信號。明確正常信號和異常信號的特點，可能涉及多種異常信號，均應(yīng)詳細(xì)說明。建議采用文字結(jié)合圖示的方法明確對細(xì)胞和信號計數(shù)或不計數(shù)的規(guī)則，用列表的方式列舉結(jié)果觀察中遇到的問題、原因及解決方案。說明當(dāng)細(xì)胞核數(shù)量不足時的處理方式。

質(zhì)量控制：質(zhì)控品應(yīng)和樣本同時進(jìn)行檢測，以監(jiān)測實驗的完成情況，并判斷信號計數(shù)的準(zhǔn)確性。明確質(zhì)控品的使用頻率，對質(zhì)控品的判讀標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)與樣本一致。如試劑盒中包含質(zhì)控品，應(yīng)介紹其樣本來源和結(jié)果信息；如試劑盒中不包含質(zhì)控品，應(yīng)明確配套使用的質(zhì)控品信息。明確各質(zhì)控品的結(jié)果要求和不符合要求時的處理措施。

8.【陽性判斷值】：應(yīng)明確陽性和/或陰性的全部信號類型及對應(yīng)的閾值，應(yīng)與陽性判斷值確定資料一致。

9.【檢驗結(jié)果的解釋】：按要求計數(shù)一定數(shù)量的細(xì)胞核后，根據(jù)陽性判斷值，對結(jié)果做出正?；虍惓５慕忉尅？山Y(jié)合圖示的方式，對不同信號類型進(jìn)行解釋。明確何種結(jié)果需進(jìn)行擴(kuò)大計數(shù)，或重新雜交，或判斷實驗無效。

10.【檢驗方法的局限性】

綜合產(chǎn)品的預(yù)期用途、臨床背景和檢測方法等信息，對可能出現(xiàn)的局限性進(jìn)行相關(guān)說明，主要包括以下描述，請申請人選擇適用的條款在產(chǎn)品說明書中予以闡述。

10.1本產(chǎn)品的檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合其病史、危險因素及其他實驗室檢查結(jié)果做出臨床診斷，不可僅憑本產(chǎn)品的檢測結(jié)果采取任何不可逆的治療措施。

10.2如果樣本污染/細(xì)胞數(shù)量不足/樣本玻片準(zhǔn)備不當(dāng)，實驗結(jié)果將無效。

10.3描述本產(chǎn)品不能檢測的其他異常信號類型，例如罕見異常，其他染色體結(jié)構(gòu)異常、低水平嵌合等。

10.4描述本產(chǎn)品能夠檢測但不能區(qū)分的信號類型。

10.5指出具體樣本類型檢測中可能出現(xiàn)的影響因素，例如：產(chǎn)前染色體數(shù)目檢測試劑，在檢測絨毛膜樣本時，可能因嵌合現(xiàn)象影響產(chǎn)品的可靠性。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

根據(jù)產(chǎn)品特征和分析性能評估資料，詳述以下性能指標(biāo)：

11.1外觀：描述產(chǎn)品各成分的外觀狀態(tài)。

11.2探針敏感性：說明敏感性研究的細(xì)胞類型、試驗方法及結(jié)果。

11.3探針特異性：說明特異性研究的細(xì)胞類型、試驗方法及結(jié)果。

11.4陰、陽性符合率：說明陰陽性樣本信息和符合率結(jié)果。

11.5精密度：說明批內(nèi)、批間精密度及不同時間、地點和人員之間的精密度。

11.6最低檢出限：明確產(chǎn)品可以檢測的低比例嵌合水平下限。

11.7干擾物質(zhì)：明確樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。

11.8臨床試驗數(shù)據(jù)總結(jié)。

12.【注意事項】

12.1生物樣本的安全性警告。

12.2試劑的安全性警告。

12.3使用非說明書描述的配套試劑，可能會影響結(jié)果。

12.4未按照說明書進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)操作，會對結(jié)果產(chǎn)生不良影響。

12.5所有涉及熒光染料的溶液/玻片儲存或操作均應(yīng)避光或在弱光下進(jìn)行。

12.6應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)溫度，使用校準(zhǔn)過的溫度計測定溶液、水浴槽和溫箱溫度，或者定期校準(zhǔn)相關(guān)儀器。

三、名詞解釋

臨床參考標(biāo)準(zhǔn)：現(xiàn)有條件下臨床上可獲得的能夠用來確定受試者目標(biāo)狀態(tài)（健康狀態(tài)、疾病狀態(tài)、疾病進(jìn)程、指導(dǎo)臨床處置的疾病或健康狀態(tài)等）的最佳方法，通常來自臨床和實驗室的醫(yī)學(xué)實踐，包括：現(xiàn)有條件下公認(rèn)的、可靠的、權(quán)威的疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)（如組織病理學(xué)檢查、影像學(xué)檢查、病原體分離培養(yǎng)鑒定、長期隨訪所得的結(jié)論等），疾病診療指南中明確的疾病診斷方法，行業(yè)內(nèi)的專家共識或臨床上公認(rèn)的、合理的參考方法等。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)可能是一種方法，也可能是多種方法相結(jié)合。

四、編寫單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。