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總膽汁酸測定試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對總膽汁酸（Total bile acids，TBA）測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對總膽汁酸測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特征對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員適用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)、國家標準、行業(yè)標準的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當(dāng)前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于基于采用3α-羥基類固醇脫氫酶（3α-HSD）催化的酶促循環(huán)反應(yīng)（酶循環(huán)法）原理，利用全自動生化分析儀、半自動生化分析儀或分光光度計，體外定量測定人血清或血漿中總膽汁酸含量的試劑盒。本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

反應(yīng)原理如圖所示。膽汁酸被3α-HSD及β-硫代氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NAD⁺）特異性地氧化，生成3α-酮類固醇（3α-KS）及β-硫代還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Thio-NADH）。此外，生成的3α-KS在3α-HSD及還原型輔酶I（NADH）存在下，又生成膽汁酸和氧化型輔酶I（NAD⁺）。這樣，血清或血漿中微量的膽汁酸在多次酶循環(huán)的過程中被放大，同時可使生成的Thio-NADH擴增，其擴增速率與膽汁酸的含量相關(guān)。通過測定Thio-NADH在405nm波長附近吸光度的變化率，從而計算出血清或血漿中膽汁酸的含量。

Thio-NAD⁺                Thio-NADH              

                                3α-HSD

膽汁酸                                    3α-酮類固醇

Bile acid                                      3α-KS

 NAD⁺                     NADH   

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），總膽汁酸檢測試劑盒屬于用于其他生理、生化或免疫功能指標檢測的檢測試劑，管理類別為二類，分類代碼為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面的說明、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預(yù)期用途及相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況

1.1總膽汁酸測定試劑用于體外定量測定血清或血漿中總膽汁酸的含量。

1.2總膽汁酸的生物學(xué)特征、結(jié)構(gòu)與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

1.3與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，如臨床相關(guān)疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過程，校準品的制備方法及溯源情況（如需提供）、質(zhì)控品的制備方法及定值情況（如需提供）。

3.有關(guān)生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，人源性材料須對有關(guān)傳染?。?/span>HIV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關(guān)的證明文件，其他動物源及微生物來源的材料，應(yīng)當(dāng)提供相應(yīng)的說明文件。為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，應(yīng)提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價。

5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

包括主要反應(yīng)成分、質(zhì)控品（如適用）、校準品（如適用）等的選擇、制備、質(zhì)量標準確定的方法及研究資料；校準品應(yīng)提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質(zhì)控品應(yīng)提供詳細的定值資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

主要工藝包括：配制、分裝、凍干等描述及確定依據(jù)，應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關(guān)鍵控制點；反應(yīng)體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應(yīng)條件（溫度、時間等）等。不同適用機型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)當(dāng)提交不少于3批產(chǎn)品的全部分析性能評估資料，對于每項分析性能的評估都應(yīng)包括具體的研究項目、實驗設(shè)計、研究方法、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結(jié)論等詳細資料。性能評估時應(yīng)將試劑和所選用的校準品、質(zhì)控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關(guān)分析性能驗證的背景信息也應(yīng)在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準品和質(zhì)控品（品牌、規(guī)格、批號等）、臨床樣本來源等。

對于TBA定量測定試劑，分析性能評估應(yīng)至少包括試劑空白吸光度、試劑空白吸光度變化率、準確度、精密度、線性區(qū)間、分析靈敏度、分析特異性等性能指標。干粉或凍干試劑還應(yīng)包括批內(nèi)瓶間差。

1.空白吸光度

用指定空白樣本測試試劑盒，在405nm 波長附近、1cm光徑條件下，記錄測試啟動時的吸光度（A₁），扣除反應(yīng)的非線性段或約5 分鐘（T）后的吸光度（A₂），A₂測試結(jié)果即為試劑空白吸光度測定值，結(jié)果均值應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標的要求。

2.試劑空白吸光度變化率

記錄測試啟動時的吸光度（A₁），扣除反應(yīng)的非線性段或約5分鐘（T）后的吸光度（A₂），計算出吸光度變化值（），即為試劑空白吸光度變化率（（A/min），結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標的要求。

3.準確度

對測量準確度的評價依次包括：與國家參考物（和/或國際參考物）的偏差分析、回收試驗、方法學(xué)比對等方法，申請人可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

3.1與國家參考物（和/或國際參考物）的偏差分析

用有證參考物質(zhì)（CRM）或其他公認的參考物質(zhì)或由參考方法定值的高、低2個濃度的人源樣品，對試劑盒進行測試，重復(fù)測定3次，取測試結(jié)果均值（M），根據(jù)公式（1）計算相對偏差。如果3次結(jié)果都符合規(guī)定，即判為合格；如果大于等于2次的結(jié)果不符合，即判為不合格；如果有1次結(jié)果不符合規(guī)定，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，分別計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合規(guī)定，即判為合格。

………………………（1）

式中：B—相對偏差；M—測試結(jié)果均值；T—有證參考物質(zhì)標示值，或各濃度人源樣品定值。

3.2回收試驗

在人源樣品中加入一定體積標準或校準品或純品溶液，每個濃度重復(fù)測定3次，計算回收率。

回收試驗注意事項：

3.2.1加入的標準或校準品或純品溶液體積與人源樣品體積比應(yīng)不大于1:19或其體積比不會產(chǎn)生基質(zhì)的變化。

3.2.2加入標準溶液或校準品溶液或純品溶液后，樣品總濃度應(yīng)在試劑盒測定線性范圍內(nèi)。

3.2.3標準或校準品或純品溶液應(yīng)有溯源性。

3.3比對試驗

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比試劑，與擬申報試劑同時檢測一批臨床樣品（至少40例樣本），從測定結(jié)果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結(jié)果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結(jié)果。

在實施方法學(xué)比對前，應(yīng)分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標準后方可進行比對試驗。方法學(xué)比對時應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結(jié)果進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。

方法學(xué)比對注意事項：

3.3.1樣本貯存時間及條件由被測組分的穩(wěn)定性而定，盡可能避免使用貯存的樣品；

3.3.2應(yīng)采用人源樣品，并且此樣本對于被測組成的影響應(yīng)明確，盡量不使用含有干擾此方法的組分或條件；

3.3.3分析濃度盡可能在報告的濃度范圍內(nèi)均勻分布；

3.3.4商品質(zhì)控物或者校準物可能存在基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)避免使用。

4.精密度

4.1批內(nèi)精密度

批內(nèi)精密度評估應(yīng)至少選擇高、低兩個濃度水平的樣本（或質(zhì)控品）進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的正常參考值附近和異常值樣本，建議采用人源樣品或與人源樣品基質(zhì)接近的樣本進行試驗。批內(nèi)精密度（變異系數(shù)CV）應(yīng)不大于5.0%， 批內(nèi)瓶間差（干粉或凍干試劑適用）應(yīng)不大于5.0%。

4.2批間精密度

用同一質(zhì)控品分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測定3次，分別計算每批3次測定的均值。相對極差應(yīng)不大于10.0%。

5.線性區(qū)間

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用物質(zhì)的樣本。理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的混合人血清（或其他人源樣品），且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。

建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7—11個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，確定線性范圍。

也可以采用高濃度樣本稀釋的方法驗證線性，將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區(qū)間的下限。按試劑盒說明書操作，對每一濃度的樣本均重復(fù)檢測2次，計算其平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，計算線性相關(guān)系數(shù)r，應(yīng)不低于0.9900。

6.分析靈敏度

試劑盒測試給定濃度的被測物時，在試劑盒規(guī)定參數(shù)下所得的單位濃度吸光度變化率（ΔA/min）應(yīng)符合申請人規(guī)定范圍。

7.分析特異性

對樣本中常見的干擾物質(zhì)進行檢測，干擾物濃度的分布需覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，如膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、維生素C、血紅蛋白等，方法為對模擬添加樣本分別進行驗證，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準，確定可接受的干擾物質(zhì)濃度（結(jié)果應(yīng)量化表示，避免使用輕度、嚴重等模糊表述）。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

8.校準品溯源及質(zhì)控品賦值（如產(chǎn)品中包含）

在注冊單元包括質(zhì)控品和校準品時，校準品應(yīng)當(dāng)提交完整的溯源性文件，包括賦值試驗資料和溯源SOP文件等。應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。同時，應(yīng)對校準品、質(zhì)控品的賦值結(jié)果的瓶內(nèi)均勻性、瓶間均勻性，以及其賦值結(jié)果的準確度進行評價。如校準品或質(zhì)控品的基質(zhì)不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交校準物質(zhì)互換性的相關(guān)研究資料。

9.其他需注意的問題

應(yīng)當(dāng)對不少于3批產(chǎn)品進行性能評估，對結(jié)果進行統(tǒng)計分析。不同適用機型、不同包裝規(guī)格，應(yīng)分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。如注冊申請中包括不同適用機型，需要提交在不同機型上進行上述項目評估的試驗資料及總結(jié)。

試劑盒的樣本類型如包括血清和血漿樣本，則應(yīng)對二者進行相關(guān)性研究以確認二者檢測結(jié)果是否完全一致或存在某種相關(guān)性（如系數(shù)關(guān)系）。對于血漿樣本，申請人應(yīng)對不同的抗凝劑進行研究以確認最適的抗凝條件以及是否會干擾檢測結(jié)果。

性能指標的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征進行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體研究方法建議參考相關(guān)的國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

（五）參考區(qū)間確定資料

應(yīng)提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細的試驗資料。應(yīng)明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。

若引用針對中國人群參考區(qū)間研究的相關(guān)權(quán)威指南，應(yīng)明確說明出處，提交文獻資料并說明引用依據(jù)，應(yīng)采用一定數(shù)量的臨床樣本對該參考區(qū)間進行驗證。參考區(qū)間研究結(jié)論應(yīng)與說明書【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（待機）穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制（如適用）等。對于實時穩(wěn)定性研究，申請人應(yīng)提供不少于3個生產(chǎn)批次在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料，并提供至少1個生產(chǎn)批次的開瓶穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結(jié)論等。如產(chǎn)品包含校準品和質(zhì)控品，還應(yīng)提供相應(yīng)穩(wěn)定性試驗研究資料。試劑的穩(wěn)定性研究應(yīng)注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究。適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏或冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本的穩(wěn)定性進行分析驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行評價。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

根據(jù)《關(guān)于公布新修訂免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號），總膽汁酸檢測試劑可免于進行臨床試驗，申請人可依照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》開展評價。申請人如無法或不適于按照上述要求對產(chǎn)品進行臨床評價，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗。下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡述。

1.研究方法

采用國內(nèi)/國際普遍認為質(zhì)量較好的已上市同類試劑作為參比方法，采用擬申報產(chǎn)品與之進行對比試驗研究，證明擬申報產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品等效。

對比試驗結(jié)果不一致（檢測值差異較大）的樣本應(yīng)采用參考方法進行驗證。

2.臨床研究單位的選擇

應(yīng)在至少兩家經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局備案的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。臨床試驗機構(gòu)實驗操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和對照試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。

3.倫理要求

臨床試驗必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準則，必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意，如該臨床試驗對受試者幾乎沒有風(fēng)險，可經(jīng)倫理委員會審查和批準后免于受試者的知情同意。

4.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預(yù)試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室承擔(dān)本實驗的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗結(jié)果的客觀性。各臨床試驗機構(gòu)選用的參比試劑應(yīng)保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學(xué)分析。另外，待評試劑的樣本類型應(yīng)不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構(gòu)倫理委員會的同意。

5.研究對象選擇

臨床試驗應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。注冊申請人在建立病例納入標準時，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結(jié)果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本比例應(yīng)不低于試驗總量的30%。樣本中待測物濃度應(yīng)覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

應(yīng)明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。

如果待評試劑同時適用于血清和血漿樣本類型，可完成一個樣本類型不少于200例的臨床研究，同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結(jié)果間的一致性（采用待評試劑檢測），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的200例進行試驗，異常值參照上述規(guī)定。

涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于30%。陽性判斷值或參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

6.統(tǒng)計學(xué)分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計方法，結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布等情況，建議統(tǒng)計學(xué)負責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計學(xué)方法進行分析，統(tǒng)計分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。如相關(guān)分析、線性回歸、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析、配對t檢驗等?？己嗽噭┖蛯Ρ仍噭﹥山M檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計的檢驗水準及檢驗的假設(shè)，即評價考核試劑與對比試劑是否等效的標準。    如試劑盒同時適用于血清和血漿樣本，可采用如相關(guān)分析、線性回歸、配對t檢驗等統(tǒng)計學(xué)方法來評價血漿和血清樣本測試結(jié)果間的一致性。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應(yīng)該對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結(jié)報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

7.1臨床試驗總體設(shè)計及方案描述

7.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構(gòu)選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

7.1.2納入/排除標準、不同人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標準。

7.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

7.1.4統(tǒng)計學(xué)方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結(jié)果的標準。

7.2具體的臨床試驗情況

7.2.1待評試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

7.2.2對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合。

7.2.3質(zhì)量控制，試驗人員培訓(xùn)、儀器日常維護、儀器校準、質(zhì)控品運行情況，對檢測精密度、質(zhì)控品回收（或測量值）、抽查結(jié)果評估。

7.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。

7.3統(tǒng)計學(xué)分析

7.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

7.3.2定量值相關(guān)性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和r、R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，r是相關(guān)系數(shù)（要求r＞0.975），如r＜0.975，應(yīng)適當(dāng)擴大樣本量以擴大數(shù)據(jù)范圍，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95），計算回歸系數(shù)及截距的95%可信區(qū)間。    分別計算醫(yī)學(xué)決定水平處（或正常參考區(qū)間上限）相對偏倚/偏差及95%置信區(qū)間。醫(yī)學(xué)決定水平處（或正常參考區(qū)間上限）相對偏倚應(yīng)不大于允許誤差（建議參照1/2CLIA’88、1/2室間質(zhì)評可接受范圍、1/2來源于生物變異的總允許誤差、衛(wèi)生行業(yè)標準等相關(guān)要求設(shè)定允許誤差）。    應(yīng)給出考核試劑與對比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）或比值（相對偏倚/偏差）散點圖，觀察并分析各點的偏倚分布情況。    通過相關(guān)性分析、配對t檢驗等統(tǒng)計分析方法綜合評價考核試劑與對比試劑等效性。

7.4討論和結(jié)論

對總體結(jié)果進行總結(jié)性描述并簡要分析試驗結(jié)果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結(jié)論。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設(shè)計開發(fā)、原材料的采購控制、生產(chǎn)、預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知和可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析、風(fēng)險評價和相應(yīng)的風(fēng)險控制基礎(chǔ)上，形成風(fēng)險管理報告。應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)行業(yè)標準的要求。

風(fēng)險分析應(yīng)包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：

預(yù)期用途錯誤包括：設(shè)計開始時未設(shè)定預(yù)期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定量失效、量值溯源失效、校準失效。不正確的結(jié)果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設(shè)計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應(yīng)體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組分、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當(dāng)，客戶未參照產(chǎn)品說明書設(shè)置參數(shù)或使用。與安全性有關(guān)的特征包括：有毒化學(xué)試劑的化學(xué)污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結(jié)果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關(guān)文獻，按照《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標和檢驗方法。

下面就產(chǎn)品技術(shù)要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關(guān)標準和主要性能指標等相關(guān)內(nèi)容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品適用的相關(guān)標準

GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》

GB/T 29791.1—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標示 第1部分：術(shù)語定義和通用要求》

GB/T 29791.2—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標示 第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑》

GB/T 26124—2011《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）》

YY/T 1204—2013《總膽汁酸測定試劑盒（酶循環(huán)法）》

YY/T 1227—2014《臨床化學(xué)體外診斷試劑（盒）命名》

2.主要性能指標

2.1外觀

符合制造商規(guī)定的正常外觀要求。

2.2裝量

液體試劑的裝量應(yīng)不少于標示量。

2.3試劑空白吸光度

2.3.1空白吸光度

在405nm波長附近，測定指定空白樣品的吸光度值，重復(fù)兩次，均值即為空白吸光度，試劑空白吸光度應(yīng)不大于0.8（光徑1.0cm）。

2.3.2試劑空白吸光度變化率

在405nm波長附近、光徑1.0cm下，空白吸光度的變化率應(yīng)不大于0.04/min。

2.4線性區(qū)間

線性區(qū)間上限至少達到150μmol/L，在線性區(qū)間內(nèi)，理論濃度與實測濃度的線性相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。

2.5準確度

2.5.1提供參考物質(zhì)或用參考方法定值的人源樣品測定，實測值與標示值的偏差在±15.0%內(nèi)。

2.5.2以標準或校準品或純品溶液測定，試劑盒回收率在90%～110%內(nèi)。

2.5.3無具有溯源性的標準或校準品或純品溶液，以比對方法測定，相關(guān)系數(shù)r應(yīng)不小于0.9900。

2.6分析靈敏度

試劑盒測試被測物時，單位濃度吸光度變化率應(yīng)符合制造商給定區(qū)間。

2.7精密度

2.7.1批內(nèi)精密度

在重復(fù)性條件下，用高、低值質(zhì)控品測試同一批號試劑盒，重復(fù)測試至少10次，計算批內(nèi)變異系數(shù)（CV），應(yīng)不大于5.0%。

用高、低值質(zhì)控品分別測試同一批號的20個待檢試劑盒，并計算20個測量值的平均值（₁）和標準差（s₁）。

用高、低質(zhì)控品對該批號的1個待檢測試劑盒重復(fù)測試20次，計算結(jié)果的均值（₂）和標準差（s₂）。按公式（2）、（3）計算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內(nèi)瓶間差（干粉或凍干試劑適用）均應(yīng)不大于5%。

……………………………（2）

……………………………（3）

當(dāng)s₁＜s₂時，令CV=0

2.7.2批間精密度

用同一質(zhì)控品分別測試3個不同批號的試劑盒，每個批號測試3次，分別計算每批3次測定的均值。相對極差應(yīng)不大于10.0%。

2.8穩(wěn)定性

取到效期后一定時間內(nèi)或制造商規(guī)定的加速實驗條件下的試劑盒測試，產(chǎn)品性能應(yīng)符合外觀、試劑空白、線性區(qū)間、準確度、分析靈敏度、批內(nèi)精密度要求。干粉或凍干試劑還應(yīng)同時進行復(fù)溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應(yīng)符合試劑空白、線性區(qū)間、準確度、分析靈敏度、批內(nèi)精密度要求。注：加速穩(wěn)定性不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品有效期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。

如注冊單元中包含校準品或質(zhì)控品，其性能指標的檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)當(dāng)包括準確度、均勻性、開瓶/復(fù)溶穩(wěn)定性的檢驗方法的詳細描述。如有新版強制性國家標準、行業(yè)標準發(fā)布實施，應(yīng)參照執(zhí)行。

（十）注冊檢驗報告

根據(jù)《體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式》的要求，應(yīng)提供具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗機構(gòu)出具的產(chǎn)品注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見?？偰懼崛缬袊覙藴势?，應(yīng)采用國家標準品。如有相應(yīng)的國家法規(guī)發(fā)布或更新，按其要求執(zhí)行。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、檢驗原理、檢驗方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

結(jié)合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對總膽汁酸測定試劑盒說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：總膽汁酸測定試劑盒（酶循環(huán)法）。通用名稱應(yīng)當(dāng)按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）規(guī)定的命名原則進行命名，可適當(dāng)參考相關(guān)“分類目錄”和/或國家標準及行業(yè)標準。

2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進行表述。

2.1包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙試劑類型。

2.2不得多于產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格。

2.3如不同包裝規(guī)格有對應(yīng)不同的機型，應(yīng)分別明確適用機型。

3.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1說明試劑盒用于體外定量測定血清/血漿中總膽汁酸的含量；同時應(yīng)明確與目的檢測物相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒炇以\斷方法等。

3.2總膽汁酸含量異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。如：血清TBA測定可反映肝細胞的合成、攝取和排泌功能。TBA增加是肝細胞損害的敏感指標，并有助于估計其預(yù)后和提示病情復(fù)發(fā)。

3.3作為支持性資料，申請人應(yīng)提供有關(guān)臨床適應(yīng)癥背景的文獻資料。

4.【檢驗原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分詳細說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示。

5.【主要組成成分】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個組成成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度。明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。

試劑內(nèi)如包含校準品和/或質(zhì)控品，除明確組成成分及生物學(xué)來源外，還應(yīng)明確其定值及溯源性，溯源性應(yīng)寫明溯源的最高級別，包括標準物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍。

6.【儲存條件及有效期】

6.1對試劑的效期穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等信息作詳細介紹。包括環(huán)境溫濕度、避光條件等。

6.2不同組分保存條件及有效期不同時，應(yīng)分別說明，產(chǎn)品總有效期以其中效期最短的為準。

6.3 生產(chǎn)日期，使用期限或者失效日期。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“室溫”，應(yīng)明確貯存溫度，如2℃~8℃，有效期12個月。穩(wěn)定期限應(yīng)以月或日或小時為單位。

7.【適用儀器】

7.1說明可適用的儀器，并提供與儀器有關(guān)的必要信息以便用戶能夠作出最好的選擇。

7.2應(yīng)寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

8.1樣本采集：說明采集方法及樣本類型，如有血漿樣本，應(yīng)注明對抗凝劑的要求。

8.2樣本處理及保存：樣本處理方法、保存條件及期限、運輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)。對儲存樣本的添加劑要求等。

8.3應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究一致。

9.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項。

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時間等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準程序：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

9.4質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、質(zhì)量控制方法。

9.5試驗結(jié)果的計算或讀?。簯?yīng)明確檢驗結(jié)果的計算方法。

10.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并說明參考值確定方法。建議注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實驗室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

說明可能對試驗結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；說明在何種情況下需要進行確認試驗。

若超過線性范圍上限的高濃度樣本可稀釋后測定，則應(yīng)說明樣本的最大可稀釋倍數(shù)、稀釋溶液等信息。

12.【檢驗方法的局限性】至少應(yīng)包括以下內(nèi)容：

說明該檢驗方法由于哪些原因會使測量結(jié)果產(chǎn)生偏離，或測量結(jié)果還不能完全滿足臨床需要。如：干擾（膽紅素、甘油三酯、總膽固醇、維生素C、血紅蛋白）等。

13.【產(chǎn)品性能指標】

至少應(yīng)詳述以下性能指標：

13.1試劑空白

13.2分析靈敏度

13.3準確度

13.4精密度（批內(nèi)精密度和批間精密度）

13.5線性區(qū)間（線性相關(guān)系數(shù)）

14.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

14.1本試劑的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為臨床診治的唯一依據(jù)，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

14.2使用不同生產(chǎn)商的試劑對同一份樣本進行檢測可能會存在差異。

14.3如無確切的證據(jù)證明其安全性，對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對待，提示操作者采取必要的防護措施。

14.4試劑中含有的化學(xué)成分如接觸人體后會產(chǎn)生不良的影響，應(yīng)明確給予提示。

14.5其他有關(guān)總膽汁酸測定的注意事項。

15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】

注明引用參考文獻，其書寫應(yīng)清楚且格式規(guī)范統(tǒng)一。

17.【基本信息】

17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息：

注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑

按照以下格式標注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

應(yīng)當(dāng)寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號

19.【說明書核準日期及修改日期】

應(yīng)注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點

（一）產(chǎn)品技術(shù)要求中性能指標的設(shè)定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標準的要求；技術(shù)要求的格式是否符合《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

（二）產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，相關(guān)內(nèi)容是否符合《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）中對說明書的要求。

（三）分析性能評估指標及結(jié)果是否支持產(chǎn)品技術(shù)要求的確定；是否滿足本指導(dǎo)原則中各指標驗證的要求。

（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（五）試劑的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否和說明書聲稱一致。

（六）臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑盒聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（七）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

四、編寫單位

江西省醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。