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抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊技術(shù)

審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

從方法學(xué)考慮，在本文中抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒是指采用化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)，利用全自動、半自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，對人血清或血漿等樣本中抗甲狀腺過氧化物酶抗體的含量進行體外定量分析的試劑?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法主要有直接化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光、酶促間接化學(xué)發(fā)光等。

根據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒的管理類別為二類，分類代碼為6840。本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。

本指導(dǎo)原則不適用于：

（一）單獨申請注冊的抗甲狀腺過氧化物酶抗體校準品和質(zhì)控品。

（二）化學(xué)發(fā)光免疫分析法原理之外的其他抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

甲狀腺過氧化物酶（thyroid peroxidase，TPO），是催化甲狀腺激素的重要酶，由甲狀腺濾泡細胞合成。其主要成分是由933個氨基酸殘基組成的分子量103kD的10%糖化的血色素樣蛋白質(zhì)，表達在細胞表面，在濾泡腔面的微絨毛處分布最為豐富。該酶可與甲狀腺球蛋白（Thyroglobulin，Tg）協(xié)同作用將L-酪氨酸碘化，并將一碘酪氨酸和二碘酪氨酸聯(lián)結(jié)成為甲狀腺激素T₄、T₃和rT₃。TPO也是自身免疫性甲狀腺疾病一種重要的自身抗原，可以刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗TPO抗體（Antibodies to thyroid peroxidase，Anti-TPO）。Anti-TPO作為自身免疫性甲狀腺疾病一種主要的自身抗體，可通過激活補體、抗體依賴細胞介導(dǎo)的細胞毒作用和致敏的T殺傷細胞直接殺傷等作用機制，引起甲狀腺濾胞損傷，間接的抑制甲狀腺素的合成，導(dǎo)致甲狀腺功能減退。檢測該類抗體的主要適用癥為自身免疫性甲狀腺疾病（包括突眼性甲狀腺腫和橋本甲狀腺炎等）。

Anti-TPO抗體主要以IgG類為主，該抗體主要見于自身免疫性甲狀腺病，如橋本甲狀腺炎（陽性率85%~100%）、Graves?。栃月?/span>65%）、原發(fā)性黏液性水腫患者；也見于其他器官特異性自身免疫病，如1型糖尿?。栃月?/span>14%）、Addison?。栃月?/span>31%）、惡性貧血（陽性率55%）及產(chǎn)后甲狀腺炎（陽性率15%）等。目前認為，Anti-TPO抗體為人類自身免疫性甲狀腺炎較理想的標志抗體，陽性結(jié)果可用于自身免疫性甲狀腺疾病的輔助診斷。

綜述資料應(yīng)主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性方面的說明、研究結(jié)果的總結(jié)評價以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)、臨床應(yīng)用情況、申報注冊產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的異同方面進行介紹。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

1.所用抗原/抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細試驗資料。如抗原/抗體為申請人自制，則應(yīng)詳述抗原/抗體的名稱及生物學(xué)來源，申請人對該抗原/抗體技術(shù)指標的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價等），且其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定，并對其工藝有相關(guān)的驗證。同時確定該抗原/抗體作為主要原材料的依據(jù)和質(zhì)量標準；如為申請人外購，則應(yīng)詳述其名稱及生物學(xué)來源，外購方名稱，提交外購方出具的抗原/抗體性能指標及檢驗證書，詳述申請人對該抗原/抗體技術(shù)指標的要求以及申請人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。

2.質(zhì)控品（如有）的原料選擇、制備、定值過程及試驗資料。

3.申請人應(yīng)根據(jù)GB/T 21415—2008/ISO 17511：2003《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》提供所用校準品的來源、賦值過程和相應(yīng)指標、以及不確定度等內(nèi)容。明確校準品的質(zhì)量標準并提供校準品的溯源性文件，校準品應(yīng)溯源至現(xiàn)行的國家標準品或國際標準品。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

生產(chǎn)工藝主要包括：各組分制備工藝的研究，包括試劑的配方及工藝關(guān)鍵參數(shù)的確定依據(jù)等。反應(yīng)體系主要包括：反應(yīng)條件、樣本用量、試劑用量等確定的依據(jù)。

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹。

3.抗原/抗體包被工藝研究：申請人應(yīng)考慮如包被緩沖液及添加量、濃度、時間、溫度等指標對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述指標的最佳組合。

4.體系反應(yīng)條件確定：申請人應(yīng)考慮反應(yīng)模式、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對產(chǎn)品性能的影響，通過試驗確定上述條件的最佳組合。

5.體系中樣本及試劑的加樣方式及添加量確定：申請人應(yīng)考慮樣本加樣方式、加樣量以及試劑添加順序、添加量對產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實驗確定最佳的樣本及試劑的添加方式和添加量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進行處理后方可用于最終檢測，申請人還應(yīng)對可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進行研究，通過試驗確定樣本稀釋基質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他試劑用量（校準品、標記物、底物等）的研究資料。

（四）分析性能評估資料

企業(yè)應(yīng)提交產(chǎn)品研制階段的所有性能驗證的研究資料，包括具體研究方法、質(zhì)控標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析等詳細資料。建議選擇不少于3批產(chǎn)品對以下分析性能進行研究，包括檢出限、線性、準確度、重復(fù)性、批間差、特異性等指標。

對于適用多個機型的產(chǎn)品，應(yīng)提供產(chǎn)品說明書【適用儀器】項中所列的所有型號儀器的性能評估資料。如產(chǎn)品涉及不同包裝規(guī)格，則需要提供每個包裝規(guī)格在不同型號儀器上的評估資料；如不同包裝規(guī)格之間不存在性能上的差異，需要提交包裝規(guī)格間不存在性能差異的說明。

1.準確度

按以下優(yōu)先順序選擇準確度性能評估方法，其結(jié)果應(yīng)滿足相關(guān)國際/國家及行業(yè)標準的要求：

1.1相對偏差

根據(jù)企業(yè)提供的試劑盒線性區(qū)間，將有證參考物質(zhì)或其他公認的參考物質(zhì)，或由參考方法定值的人源性樣品（可適當添加被測物，以獲得高濃度的樣品）作為樣本，合理設(shè)置2~3個濃度，將其作為樣本按照待測試劑盒說明書的步驟進行檢測，每個樣品重復(fù)測定3次，測試結(jié)果記為（Xi），按式（1）分別計算相對偏差（Bi）。如果3次結(jié)果都符合要求，即判為合格。如果大于等于2次的結(jié)果不合格，即判為不合格。如果有1次結(jié)果不符合要求，則應(yīng)重新連續(xù)測試20次，并分別按照公式（1）計算相對偏差，如果大于等于19次測試的結(jié)果符合要求。

  ……………（1）

式中：

       Bi——相對偏差；

       Xi——測量濃度；

        T——標定濃度。

注：優(yōu)先考慮使用國家標準品或國際標準品、參考品。

1.2比對試驗

參考體外診斷試劑分析性能評估相關(guān)技術(shù)審查指導(dǎo)原則的要求完成準確度（方法學(xué)比對）評估。

取不少于40個合理分布在線性區(qū)間內(nèi)不同濃度的人血清或/和血漿樣本，待測Anti-TPO試劑與生產(chǎn)企業(yè)選定的比對系統(tǒng)進行比對試驗。每份樣本按待測試劑及選定比對系統(tǒng)的要求分別進行檢測，每份樣本各測定1遍，用線性回歸方法對兩組結(jié)果進行線性擬合，得到線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)（r）和斜率，計算各個樣本的待測試劑測定值與比對系統(tǒng)測定值的絕對偏差或相對偏差。

1.3回收實驗

參考體外診斷試劑分析性能評估相關(guān)技術(shù)審查指導(dǎo)原則要求完成準確度（回收實驗）評估。

方法：選擇接近參考區(qū)間的常規(guī)檢測樣本，分為體積相同的3—4份，在其中2—3份樣本中加入不同濃度相同體積的待測物標準液制備待回收分析樣本，加入體積小于原體積的10%，制成2—3個不同濃度的待回收分析樣本，計算加入的待測物的濃度。在另一份樣本中加入同樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎(chǔ)樣本。用待評價系統(tǒng)對待回收分析樣本和基礎(chǔ)樣本進行測定，通常對樣本進行3次重復(fù)測定，計算均值，取其均值進行下述計算，求得回收率。

數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告：

用公式（2）計算回收率：

……（2）

式中：R—回收率；

V—加入待測物標準液的體積；

V₀—基礎(chǔ)樣本的體積

C—基礎(chǔ)樣本加入待測標準物質(zhì)后的檢測濃度；

C₀—基礎(chǔ)樣本的檢測濃度；

Cs—待測物標準液的濃度。

2.檢出限（LOD）

申請人應(yīng)評估空白限（LOB）和檢出限（LOD）。

空白限的建立可使用檢測零濃度校準品或樣本稀釋液的方法進行。例如重復(fù)測定20次，根據(jù)測量結(jié)果的平均值（M）和標準差（SD），計算M+2SD及其對應(yīng)的濃度值，結(jié)果應(yīng)符合企業(yè)規(guī)定要求。

檢出限的確立可采用系列稀釋參考品的方法進行。建議使用國際參考品/國家參考品進行梯度稀釋并進行至少60次檢測，95%以上的檢測結(jié)果高于空白限作為檢出限。最低檢出限應(yīng)不高于12IU/ml。另外，應(yīng)使用最低檢出限或接近最低檢出限水平的樣本進行檢出限的驗證，結(jié)果應(yīng)符合產(chǎn)品技術(shù)要求性能指標的要求。

3.線性

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測定上限的人血清/血漿，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對樣本基質(zhì)的影響。建立一種定量測定方法的線性范圍時，需在預(yù)期測定范圍內(nèi)選擇7—11個濃度水平。例如，將預(yù)期測定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實驗結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，確定線性范圍。

驗證線性范圍時，可以采用高濃度樣本稀釋的方法驗證線性，將接近線性區(qū)間上限的高值樣本按一定比例稀釋為至少5種濃度，其中低值濃度的樣本須接近線性區(qū)間的下限。按試劑說明書操作，對每一濃度的樣本均重復(fù)檢測不少于2次，計算其平均值，將結(jié)果平均值和稀釋比例用最小二乘法進行直線擬合，計算線性相關(guān)系數(shù)r，應(yīng)不低于0.9900，線性區(qū)間應(yīng)不窄于[12，400]IU/mL。

4.重復(fù)性

重復(fù)性的評估應(yīng)包括至少兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應(yīng)在試劑的測量范圍內(nèi)，且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的正常參考值附近樣本和病理高值樣本，建議采用濃度為（30±6）IU/mL和（200±40）IU/mL的樣本。

分別用不同濃度的樣本各重復(fù)檢測10次，計算10次測量結(jié)果的平均值（M）和標準差（SD），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV）。

CV= SD/M×100%  ……………………（3）

5.批間差

用3個批號的試劑盒分別檢測濃不同濃度（建議與重復(fù)性樣本濃度的選擇一致）的樣本，各重復(fù)10次，計算每個濃度樣本30次測量結(jié)果的平均值（M）和標準差（SD），根據(jù)公式（3）得出變異系數(shù)（CV），應(yīng)不大于15%。

6.特異性

推薦參考CLSI的EP7-A2《臨床生化干擾實驗批準指南》或《WS/T416-2013 干擾實驗指南》進行特異性評估。

6.1交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗體等的驗證情況，應(yīng)至少驗證與抗甲狀腺球蛋白抗體的交叉反應(yīng)情況。

6.2干擾物質(zhì)：樣本中常見干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，如血紅蛋白、高脂、黃疸、類風(fēng)濕因子、抗核抗體、嗜異性抗體、總蛋白以及說明書中聲稱其他的干擾物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響。干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體樣本生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度。建議將研究結(jié)果在說明書中進行說明。

如無法獲得含有高濃度干擾物質(zhì)的樣本，可采用純品物質(zhì)分別添加到健康人樣本、參考區(qū)間附近樣本、中濃度值樣本中的方式進行驗證。方法為對模擬添加樣本分別進行驗證，樣本量選擇應(yīng)體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學(xué)意義，說明樣本的制備方法及干擾試驗的評價標準，確定可接受的干擾物質(zhì)極限濃度，被測物濃度至少應(yīng)包括其醫(yī)學(xué)決定水平的濃度。

7.鉤狀（HOOK）效應(yīng)（如適用）

說明不會產(chǎn)生HOOK效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋，應(yīng)注明對稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。每個濃度重復(fù)3份，對鉤狀效應(yīng)進行合理的驗證。建議在產(chǎn)品說明書上明示對鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。

過度稀釋可能影響樣本基質(zhì)，研究過程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。

8.校準品及質(zhì)控品（如適用）

參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械生物樣品中量的測量校準品和控制物質(zhì)賦值的計量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算相關(guān)資料，提供質(zhì)控品賦值及其質(zhì)控范圍確定的相關(guān)資料。Anti-TPO已有國家標準品和國際標準品，試劑盒配套校準品和質(zhì)控品，應(yīng)參照GB/T 21415—2008的要求溯源至國家（國際）標準品。如校準品或質(zhì)控品的基體不同于臨床常用樣本類型，還應(yīng)提交校準物質(zhì)互換性的相關(guān)研究資料。

9.樣本類型的研究（如適用）

如果試劑盒適用樣本類型包括血漿樣本，應(yīng)采用各種適用抗凝劑抗凝的血漿樣本分別與血清樣本進行對比實驗研究，樣本量的選擇應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)意義。方法為對比線性范圍內(nèi)的同一病人的血清和血漿樣本，樣本濃度應(yīng)均勻分布且包含醫(yī)學(xué)決定水平以及低值濃度，以驗證申報試劑盒對于血清和血漿樣本檢測結(jié)果的一致性。如同一病人的不同抗凝劑抗凝的高值血漿樣本難以獲得，可采用高值血清樣本分別添加到健康人的血清和不同抗凝劑抗凝的血漿樣本中進行驗證。

性能指標的評價方法并無統(tǒng)一的標準可依，可根據(jù)不同的試劑特征進行，前提是必須保證研究的科學(xué)合理性。具體研究方法建議參考相關(guān)國內(nèi)外有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的文件進行。

（五）參考區(qū)間確定資料

參考區(qū)間確定所采用的樣本來源、確定方法及詳細的試驗資料。樣本來源覆蓋年齡、性別等因素，盡可能考慮樣本來源的多樣性、代表性。應(yīng)明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應(yīng)低于120例。建議參考CLSI C28-A3c或WS/T 402-2012《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》進行相應(yīng)研究。

參考值研究結(jié)果應(yīng)在說明書【參考區(qū)間】項中進行相應(yīng)說明。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑盒的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。試劑盒穩(wěn)定性主要包括實時穩(wěn)定性（有效期）、運輸穩(wěn)定性、開瓶（在機）穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（干粉或凍干粉）及熱穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。對于實時穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實際儲存條件下保存至成品有效期后的研究資料。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實施方案、詳細的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論，應(yīng)涵蓋產(chǎn)品中受穩(wěn)定性影響的性能指標（如準確度、線性、重復(fù)性、檢出限等）。

樣本穩(wěn)定性研究主要包括樣本在室溫、冷藏或冷凍保存條件下抗甲狀腺過氧化物酶抗體含量的穩(wěn)定性驗證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行穩(wěn)定性驗證，從而確定不同類型樣本的保存條件及使用期限。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進行研究。

試劑盒穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中分別進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

根據(jù)《關(guān)于公布新修訂免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家藥品監(jiān)督管理局通告2018年第94號），抗甲狀腺過氧化物酶（TPO）抗體檢測試劑可免于進行臨床試驗，申請人可依照《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》開展評價。申請人如無法或不適于按照上述要求對產(chǎn)品進行臨床評價，則應(yīng)按照《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求開展臨床試驗。

下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡述。

1.臨床試驗研究方法

選擇境內(nèi)已批準上市、臨床普遍認為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進行比較研究試驗，證明本產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。對比試劑盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍、參考區(qū)間及精密度等性能接近的同類產(chǎn)品。

2.臨床試驗機構(gòu)的選擇

2.1應(yīng)在至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗。

2.2臨床試驗機構(gòu)應(yīng)有能力提供臨床試驗所需的各類樣本，實驗操作人員有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，考核試劑和對比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對儀器進行校準，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應(yīng)從臨床醫(yī)學(xué)、檢驗醫(yī)學(xué)、統(tǒng)計學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床試驗機構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預(yù)定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應(yīng)在臨床試驗機構(gòu)的實驗室內(nèi)并由本實驗室的技術(shù)人員操作完成，申報單位的技術(shù)人員除進行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應(yīng)確定嚴格的樣本納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的樣本再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結(jié)果時應(yīng)采用盲法及樣本隨機分配以保證試驗結(jié)果的客觀性。待評價試劑的樣本類型應(yīng)不超過參比試劑的樣本類型，且每種樣本類型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計學(xué)要求。

4.研究對象選擇

4.1臨床試驗樣本量的確定：在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計學(xué)要求。

4.1.1對于同源的不同樣本類型，其中一種樣本類型臨床試驗的樣本數(shù)至少為200例，其他樣本類型在至少2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)共驗證不少于100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結(jié)果間的一致性（采用考核試劑評價），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。

4.1.2應(yīng)考慮樣本量的分布，各臨床試驗機構(gòu)樣本量和樣本分布應(yīng)相對均衡。

4.2按說明書的樣本要求，明確試驗用樣本的存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿樣本應(yīng)明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應(yīng)考慮其影響。

4.3各種類型的樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑線性范圍，盡可能均勻分布。盡可能使不少于30%樣本的測定值處于參考區(qū)間以外，但在線性范圍內(nèi)。

4.4變更事項相關(guān)的臨床試驗:涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，產(chǎn)品臨床試驗總樣本數(shù)至少為100例，并在至少2家（含2家）臨床試驗機構(gòu)開展臨床試驗；變更抗原、抗體等主要原材料的供應(yīng)商、陽性判斷值或參考區(qū)間的變化及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

4.5應(yīng)考慮在臨床試驗中選擇部分含干擾物質(zhì)的標本進行對比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類風(fēng)濕因子等陽性樣本，易共存的其他自身免疫抗體同時升高的患者標本，以從臨床角度驗證試劑的特異性。

5.統(tǒng)計分析

對臨床試驗結(jié)果的統(tǒng)計應(yīng)結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況選擇合適的統(tǒng)計方法，如離群值判斷、相關(guān)分析、線性回歸、Bland-Alraman分析（如絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析）等。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對考核試劑和對比試劑兩組檢測結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，以y=a+bx和R²的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是對比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R²是判定系數(shù)，r是相關(guān)系數(shù)，同時應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間。結(jié)合臨床試驗數(shù)據(jù)的對比情況，統(tǒng)計學(xué)負責(zé)人進行統(tǒng)計分析，應(yīng)可以證明兩種方法的檢測結(jié)果具有較好的相關(guān)性。

分別計算醫(yī)學(xué)決定水平處或參考區(qū)間臨界值相對偏倚/偏差及95%置信區(qū)間。醫(yī)學(xué)決定水平處相對偏倚應(yīng)不大于允許誤差（建議參照1/2CLIA’88、1/2室間質(zhì)評可接受范圍、1/2來源于生物變異的總允許誤差、衛(wèi)生行業(yè)標準、準確度相對偏差等相關(guān)要求設(shè)定允許誤差）。

6.結(jié)果差異樣本的驗證

對于比較研究試驗中測定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用“金標準”或其他合理的方法進行復(fù)核，以便對臨床試驗結(jié)果進行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)詳細說明理由。

7.臨床試驗總結(jié)報告撰寫

臨床試驗總結(jié)報告應(yīng)對試驗的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點給予清晰、完整的闡述，對整個臨床試驗實施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進行條理分明的描述，并包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。具體撰寫內(nèi)容應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料

申請人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見的危害等方面的判定以及對患者風(fēng)險的估計進行風(fēng)險分析，應(yīng)符合YY/T 0316—2016/ISO 14971：2007《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》及附錄H的要求。

風(fēng)險分析資料應(yīng)包含以下內(nèi)容：

1.概述：簡要介紹風(fēng)險分析資料的編制依據(jù)、適用范圍、產(chǎn)品描述、風(fēng)險管理計劃及實施情況等。

2.風(fēng)險管理人員及其職責(zé)分工：明確風(fēng)險管理小組成員及職責(zé)，制定風(fēng)險管理流程圖，明確風(fēng)險管理活動的評審要求等。

3.風(fēng)險可接受準則：明確風(fēng)險可接受的準則。

4.預(yù)期用途和安全性有關(guān)特征的判定：以YY/T 0316—2016附錄H為基礎(chǔ)，判定產(chǎn)品預(yù)期用途和與安全性有關(guān)的特性，判定已知和可預(yù)見的危害、對患者風(fēng)險的評估，并形成問題清單。

5.風(fēng)險評價、風(fēng)險控制和風(fēng)險控制措施：對每一判定為危害的不正確結(jié)果的風(fēng)險進行評價，并制定相應(yīng)的風(fēng)險控制方案及措施。

6.綜合剩余風(fēng)險的可接受性評價：對比采取風(fēng)險控制措施前后的風(fēng)險情況，對剩余風(fēng)險的可接受性進行評價。

7.風(fēng)險控制措施驗證：對風(fēng)險控制措施的有效性進行驗證分析。

8.生產(chǎn)和生產(chǎn)后監(jiān)測：對產(chǎn)品生產(chǎn)和生產(chǎn)后的性能進行內(nèi)部和外部的監(jiān)測。內(nèi)部監(jiān)測包括生產(chǎn)過程控制，外部監(jiān)測包括用戶投訴、不良事件、第三方性能評價等。本項內(nèi)容由產(chǎn)品上市后補充，產(chǎn)品注冊時提供監(jiān)測信息表格的設(shè)計內(nèi)容。

9.風(fēng)險管理評審結(jié)論：風(fēng)險管理小組下達風(fēng)險評審結(jié)論。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

產(chǎn)品技術(shù)要求不得低于行業(yè)標準YY/T 1458—2016《抗甲狀腺過氧化物酶抗體定量檢測試劑（盒）（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）》的要求。

作為定量檢測試劑盒，產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包括以下性能指標：外觀、裝量、檢出限、線性、準確度、重復(fù)性、批間差等。若有國家標準品或國際標準品、參考品，準確度首選國家標準品或國際標準品、參考品進行評估。

如注冊單元中包含校準品或質(zhì)控品，其性能指標的檢驗方法應(yīng)在技術(shù)要求中予以描述。應(yīng)至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、賦值準確度、均勻性。凍干型校準品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗報告

根據(jù)《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的要求，首次申請注冊的第二類產(chǎn)品應(yīng)該在國家食品藥品監(jiān)督管理部門認可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測機構(gòu)進行樣品的注冊檢測。Anti-TPO已有國家參考品、標準品，在注冊檢測時應(yīng)采用國家參考品、標準品進行注冊檢驗。注冊申報資料中應(yīng)包括相應(yīng)的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評價意見。注冊審查時提出補充檢驗要求的，應(yīng)在原檢驗機構(gòu)進行檢驗。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、樣本要求、檢驗方法、檢測結(jié)果的解釋以及注意事項等重要信息，是指導(dǎo)使用者正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的編寫應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，境外試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準確且符合中文表達習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進行標注，并單獨列明文獻的相關(guān)信息。

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求并結(jié)合抗甲狀腺過氧化物酶抗體本身的特點，對試劑說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明，以指導(dǎo)注冊申報人員更合理地完成說明書編制。

1.【產(chǎn)品名稱】

（1）通用名稱：試劑盒名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：抗甲狀腺過氧化物酶抗體測定試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法）。名稱中不應(yīng)當出現(xiàn)樣本類型及定量等內(nèi)容。

（2）英文名稱（如有）應(yīng)當正確、完整，可直譯，不宜只寫縮寫。

2.【包裝規(guī)格】

（1）應(yīng)與產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格及型號一致。

（2）注明裝量或可測試的樣本數(shù)，如××測試/盒、××mL。

（3）注明各包裝規(guī)格的數(shù)量，如20mL×2。

（4）如申報產(chǎn)品的包裝規(guī)格較多，不同包裝規(guī)格之間應(yīng)按照分隔層次分別使用頓號、逗號、分號進行區(qū)分，統(tǒng)一以句號結(jié)束。如僅單一包裝規(guī)格，其后可以不加標點符號。

3.【預(yù)期用途】

第一段：產(chǎn)品的預(yù)期用途建議描述為：本產(chǎn)品用于定量檢測人血清或血漿中抗甲狀腺過氧化物酶抗體的含量。適用的樣本類型應(yīng)結(jié)合實際的臨床研究情況進行確認。

第二段：簡要介紹抗甲狀腺過氧化物酶抗體的臨床意義。注：臨床適應(yīng)癥相關(guān)信息應(yīng)提供文獻出處（標注并在【參考文獻】列出）。

4.【檢驗原理】

詳細說明檢驗原理、方法，必要時可采用圖示方法描述。

5.【主要組成成分】

5.1說明產(chǎn)品包含試劑組分的名稱、數(shù)量等信息，涉及的英文縮寫首次出現(xiàn)應(yīng)全部以中文表述。

5.2對于多組分試劑應(yīng)明確說明不同批號試劑盒中各組分是否可以互換。如可互換，應(yīng)提交相關(guān)驗證材料。

5.3如試劑盒中包含耗材，應(yīng)列明耗材名稱、數(shù)量等信息。

5.4對于產(chǎn)品中不包含，但對該試驗必需的試劑組分，應(yīng)列出此類試劑的名稱，提供稀釋或混合方法及其他相關(guān)信息。

5.5試劑盒中如包含校準品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說明其主要組成成分及其生物學(xué)來源：應(yīng)注明校準品的定值及其溯源性，溯源性至少應(yīng)寫明溯源到的最高級別，包括：標準物質(zhì)的發(fā)布單位。質(zhì)控品的靶值范圍如為批特異，可注明批特異，并附單獨的靶值單。

6.【儲存條件及有效期】

根據(jù)產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、在機穩(wěn)定性等穩(wěn)定性研究結(jié)果，對產(chǎn)品的儲存條件及有效期做以下說明：

6.1說明產(chǎn)品的儲存條件及有效期，如：2℃~8℃、-18℃以下或其他溫度條件保存的有效期限。

6.2如果打開包裝后產(chǎn)品或組分的穩(wěn)定性不同于原包裝產(chǎn)品，則打開包裝后產(chǎn)品或組分的儲存條件也必須注明。

6.3如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對各組分的儲存條件和有效期分別進行描述。

6.4對于可以冷凍的試劑盒應(yīng)注明凍融次數(shù)限制。

6.5增加“生產(chǎn)日期、使用期限或者失效日期：見標簽”的字樣。

注1：保存條件不應(yīng)有模糊表述，穩(wěn)定期限應(yīng)以月或日或小時為單位。

注2：保存條件不應(yīng)有模糊表述，如“常溫”、“室溫”，應(yīng)明確貯存溫度，如2℃~8℃，有效期12個月。

7.【適用儀器】

說明可適用的儀器及型號，應(yīng)寫明具體適用儀器的型號，不能泛指某一系列儀器。適用儀器需寫明廠家及型號，如不同包裝規(guī)格適用于不同的機型，可寫明適用關(guān)系。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：

8.1明確本產(chǎn)品適用的樣本類型，血液樣本應(yīng)當說明對采血管及抗凝劑的要求，其他樣本應(yīng)說明樣本采集、處理及保存方式。

8.2樣本采集：采集時間點是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，盡量減少由于樣本采集或處理不當對實驗造成的影響。

8.3樣本處理、運送及保存：明確樣本處理方法、樣本的保存條件及期限（短期、長期）等。冷藏/冷凍樣本檢測前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)的要求。

8.4應(yīng)與樣本穩(wěn)定性的研究一致。

9.【檢驗方法】

詳細說明實驗操作的各個步驟，包括：

9.1實驗條件：實驗環(huán)境的溫度、濕度等注意事項，檢驗試劑及樣本復(fù)溫、試劑孵育溫度等要求。

9.2試劑準備及配制方法、注意事項。

9.3待測樣本的預(yù)處理方法、步驟及注意事項。

9.4明確樣本檢測的操作步驟，如樣本滿足臨床檢測需要的加樣量及觀察時間。

9.5校準：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制方法。對適用于具有校準曲線保存功能檢測儀器的產(chǎn)品，應(yīng)注明校準周期。

9.6質(zhì)量控制：明確質(zhì)控品的選擇、質(zhì)控品的使用方法、對質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等；建議在本部分注明以下字樣：如果質(zhì)控失控時，應(yīng)分析原因并采取糾正措施。

10.【參考區(qū)間】

10.1應(yīng)注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并簡要說明參考區(qū)間確定的依據(jù)，如樣本量、人群、年齡、統(tǒng)計方法等。

10.2建議注明以下字樣“建議各實驗室根據(jù)實際條件及接觸人群建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗結(jié)果的解釋】

對所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進行合理的解釋：

11.1本試劑盒的檢測結(jié)果僅供臨床參考，不得作為患者病情評價的唯一指標，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。

11.2分析異常值出現(xiàn)的可能因素，明確說明何種情況下需要進行重復(fù)檢測，以及在重復(fù)檢測時對待測樣本可能采取的優(yōu)化條件等進行詳述。

11.3超出檢測范圍的樣本怎樣報告結(jié)果，如要得到準確的結(jié)果需怎樣處理，如需稀釋，應(yīng)注明稀釋方法、最佳或最大稀釋比例等。

12.【檢驗方法的局限性】

12.1干擾物質(zhì)及鉤狀效應(yīng)（HOOK效應(yīng)，如適用）對檢測結(jié)果的影響，結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴重等模糊表述。

12.2有關(guān)假性升高或降低結(jié)果的可能性分析。

12.3抗凝劑對檢測結(jié)果的影響（如適用）。

13.【產(chǎn)品性能指標】

根據(jù)產(chǎn)品技術(shù)要求對性能指標進行描述。應(yīng)至少包括：檢出限、準確度、線性、重復(fù)性、批間差等。

14.【注意事項】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

14.1僅用于體外診斷。

14.2有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑盒內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過了HBsAg、HIV1/2-Ab、HCV-Ab和Anti-TP等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.3使用不同生產(chǎn)商的試劑盒對同一份樣本進行檢測可能會存在差異。

14.4如無確切的證據(jù)證明其安全性，對所有樣本和反應(yīng)廢棄物都視為傳染源進行處理。

14.5有關(guān)實驗操作、樣本保存及處理等其他注意事項。

15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。如沒有，本項可以缺省。

16.【參考文獻】

注明引用的參考文獻，并在說明書相應(yīng)內(nèi)容處標注參考文獻編號。參考文獻的格式參考論文規(guī)范要求。

17.【基本信息】

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求編寫。

17.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱、住所、聯(lián)系方式，售后服務(wù)單位名稱、聯(lián)系方式、生產(chǎn)地址、生產(chǎn)許可證編號。

17.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息：注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱、住所、聯(lián)系方式、售后服務(wù)單位名稱、聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱、住所、生產(chǎn)地址、生產(chǎn)許可證編號。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

注明該產(chǎn)品的注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號。

19.【說明書核準日期及修改日期】

注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應(yīng)該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關(guān)注點

（一）技術(shù)要求中性能指標的設(shè)定及檢驗方法是否符合相關(guān)行業(yè)標準的要求；技術(shù)要求的格式是否符合《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關(guān)規(guī)定。

（二）產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求。

（三）分析性能評估指標及結(jié)果是否滿足產(chǎn)品技術(shù)要求的規(guī)定；是否滿足本指導(dǎo)原則中分析性能評估的要求。

（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學(xué)的相關(guān)要求，結(jié)論是否與說明書聲稱一致。

（五）產(chǎn)品穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結(jié)論是否與說明書聲稱一致。

（六）臨床試驗采用的樣本類型是否滿足產(chǎn)品聲稱的預(yù)期用途，樣本量及臨床試驗機構(gòu)的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結(jié)果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）或《免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）對相關(guān)內(nèi)容的規(guī)定。

（七）產(chǎn)品風(fēng)險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

四、編寫單位

廣東省食品藥品監(jiān)督管理局審評認證中心。